芍藥（Paeonia lactiflora Pall.）隸屬芍藥科芍藥屬,屬多年草本花卉,原產(chǎn)我國,具有很高的觀賞價值和經(jīng)濟價值。芍藥的生產(chǎn)面臨多種來自環(huán)境脅迫的影響,溫度、水澇及高鹽脅迫是影響植株生長發(fā)育的重要因素。此外,芍藥紅斑病也為其生產(chǎn)和觀賞帶來威脅,該病多發(fā)生于高溫高濕的條件下,主要危害芍藥葉片和莖部,嚴重時可致整株植株枯萎。因此研究芍藥抗逆相關(guān)功能基因可以為芍藥抗性基因工程育種奠定堅實的基礎。本研究在前期克隆獲得PlWRKY13和PlWRKY65基因的基礎上,通過不同脅迫處理下基因的表達特性和病毒介導的基因沉默技術(shù)（virus-induced gene silencing,VIGS）對二者的抗逆相關(guān)功能展開初步研究,主要研究結(jié)果如下:（1）從患有紅斑病的葉片中分離得到一種病原菌,經(jīng)鏡檢、測序和ITS序列同源性比對,確定其為紅斑病致病菌細極鏈格孢（Alternaria tenuissima）,將該菌ITS序列提交至NCBI,基因登陸號為MN097229。（2）利用熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR）分析不同脅迫環(huán)境下PlWRK... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學山東省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
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中文摘要
Abstract
1 引言
    1.1 WRKY轉(zhuǎn)錄因子參與植物抗逆性研究進展
        1.1.1 WRKY參與植物非生物脅迫研究進展
        1.1.2 WRKY參與植物抗病研究進展
    1.2 病毒誘導的基因沉默（VIGS）研究進展
        1.2.1 VIGS技術(shù)原理
        1.2.2 煙草脆裂病毒誘導的基因沉默技術(shù)（TRV-VIGS）的研究進展
    1.3 目的與意義
    1.4 技術(shù)路線
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 植物材料培養(yǎng)
        2.1.2 菌株和載體
        2.1.3 主要試劑及配置
        2.1.4 主要儀器
        2.1.5 引物及序列測定
    2.2 試驗方法
        2.2.1 病原菌的分離及鑒定
        2.2.2 PlWRKYs在脅迫處理下的表達分析
        2.2.3 TRV-VIGS在芍藥中的應用
        2.2.4 芍藥紅斑病接種及感病情況調(diào)查
        2.2.5 芍藥葉片內(nèi)源激素的測定
        2.2.6 病程相關(guān)基因表達分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 病原菌的分離與鑒定
        3.1.1 病原菌分離及形態(tài)鑒定
        3.1.2 rDNA-ITS序列分析
    3.2 PlWRKYs在脅迫處理下的表達分析
    3.3 VIGS沉默芍藥基因體系的建立
        3.3.1 pTRV2::PlWRKYs載體的構(gòu)建
        3.3.2 TRV病毒分子檢測
        3.3.3 qRT-PCR檢測PlWRKYs基因沉默效率
    3.4 PlWRKYs的紅斑病抗性
        3.4.1 靶向沉默植株P(guān)lWRKYs的表達響應
        3.4.2 植株內(nèi)源激素誘導表達
        3.4.3 靶向沉默植株對紅斑病的抗性分析
4 討論
    4.1 PlWRKY13和PlWRKY65 參與芍藥對多種逆境的響應
    4.2 TRV-VIGS體系在芍藥中的建立
    4.3 植物激素及其相關(guān)基因?qū)ι炙幖t斑病抗性影響
        4.3.1 JA、SA和 ABA對芍藥紅斑病抗性影響及與PlWRKYs基因的聯(lián)系
        4.3.2 病程相關(guān)基因（PR）與WRKY在抗病中的相互作用
5 結(jié)論
參考文獻
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表的學術(shù)論文


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3042786