北方白菜型冬油菜具有優(yōu)異抗寒性,是我國北方寒區(qū)唯一可越冬的冬油菜類型,研究發(fā)現,生長緩慢,根系發(fā)達,生長錐凹、苗期匍匐生長等植物學性狀與抗寒密切相關。大量試驗結果表明,生長錐表現為凹陷的品種抗寒性遠遠強于生長錐凸起的品種,由此推測抗寒性不同的品種的生長錐形態(tài)特征的調控機制可能存在差異。本研究挑選與生長錐調控相關且與實驗室轉錄組數據比較差異顯著的6個基因,定量分析其在不同抗寒性白菜型冬油菜生長錐中的表達量差異,篩選出兩個差異顯著的基因進行功能分析,主要研究結果如下:1.篩選出STM與CUC2兩個與生長錐形態(tài)相關的基因,其中,STM在抗寒性強、生長錐凹陷的品種中相對表達量低于抗寒性弱、生長錐凸起的品種,而CUC2基因相對表達量與STM基因相反,在抗寒性強、生長錐凹陷生長的品種中相對表達量高于抗寒性差、生長錐凸起生長的品種。2.克隆獲得長度分別為1554bp和1104bp的STM和CUC2基因。低溫脅迫后,STM和CUC2基因上調表達,﹣4℃時達最高值。不同品種間STM和CUC2基因相對表達存在顯著差異,STM基因在生長錐凸起的Lenox中相對表達量高于生長錐凹陷的隴油7號等品種,而CUC2... 

【文章來源】：甘肅農業(yè)大學甘肅省

【文章頁數】：81 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Summary
縮略詞
第一章 文獻綜述
    1 植物生長錐研究
        1.1 植物生長錐形態(tài)結構研究
        1.2 植物生長錐分化發(fā)育研究
    2 生長錐分化發(fā)育過程中的影響因素
        2.1 外界環(huán)境對生長錐分化的影響
        2.2 生長素和細胞分裂素對生長錐分化的影響
        2.3 活性氧對生長錐分化的影響
    3 生長錐分化發(fā)育過程中的分子調控
        3.1 生長錐分化中CLV3-WUS反饋調節(jié)機制的研究
        3.2 生長錐分化中STM-WUS協(xié)同調節(jié)機制的研究
        3.3 生長錐分化中STM與 CUC2 調節(jié)機制的研究
        3.4 生長錐分化中轉錄調控網絡的研究
        3.5 其它生長錐分化調控基因的研究
    4 生長錐分化與植物抗寒性研究
    5 研究目的及意義
        5.1 研究目的及意義
        5.2 主要研究內容
        5.3 技術路線
第二章 白菜型冬油菜生長錐分化調控基因的篩選
    1 材料與方法
        1.1 試驗材料
        1.2 試驗設計
        1.3 白菜型冬油菜生長錐相關基因的篩選
        1.4 白菜型冬油菜生長錐總RNA的提取及反轉錄
        1.5 實時熒光定量引物設計
        1.6 實時熒光定量反應條件
        1.7 基因的表達分析
        1.8 數據處理
    2 結果與分析
        2.1 總RNA的提取與引物退火溫度的篩選
        2.2 生長錐分化相關基因在不同抗寒性白菜型冬油菜生長錐中的表達
            2.2.1 STM在白菜型冬油菜生長錐中的表達
            2.2.2 WUS在白菜型冬油菜生長錐中的表達
            2.2.3 CLV3在白菜型冬油菜生長錐中的表達
            2.2.4 YUC1在白菜型冬油菜生長錐中的表達
            2.2.5 WOX4在白菜型冬油菜生長錐中的表達
            2.2.6 CUC2在白菜型冬油菜生長錐中的表達
        2.3 生長錐分化基因的表達與白菜冬油菜生長錐凹陷及抗寒性的關系
    3 討論
    4 結論
第三章 白菜型冬油菜生長錐STM、CUC2 基因的克隆及其在低溫脅迫下的表達
    1 材料與方法
        1.1 試驗材料
        1.2 試驗設計
        1.3 白菜型冬油菜生長錐RNA的提取及反轉錄
        1.4 引物設計
        1.5 培養(yǎng)基配方及抗生素
        1.6 基因克隆
        1.7 基因序列的生物信息學分析
        1.8 基因的表達分析
        1.9 數據處理
    2 結果與分析
        2.1 隴油7號生長錐STM基因的克隆
            2.1.1 隴油7號生長錐STM基因編碼蛋白質的特性分析
            2.1.2 隴油7號生長錐STM基因編碼蛋白質的結構分析
            2.1.3 隴油7號生長錐STM基因編碼的氨基酸分析
            2.1.4 隴油7號生長錐STM基因的系統(tǒng)進化分析
            2.1.5 低溫脅迫下白菜型冬油菜生長錐STM的表達分析
        2.2 隴油7號生長錐CUC2基因的克隆
            2.2.1 隴油7號生長錐CUC2基因編碼蛋白質的特性分析
            2.2.2 隴油7號生長錐CUC2基因編碼蛋白質的結構分析
            2.2.3 隴油7號CUC2基因編碼的氨基酸分析
            2.2.4 隴油7號生長錐CUC2基因的系統(tǒng)進化分析
            2.2.5 低溫脅迫下白菜型冬油菜生長錐CUC2的表達分析
    3 討論
    4 結論
第四章 白菜型冬油菜生長錐STM、CUC2 組織表達及定位分析
    1 材料與方法
        1.1 試驗材料
            1.1.1 藥品及試劑材料
        1.2 試驗設計
        1.3 Gateway入門克隆引物設計
        1.4 Gateway入門克隆
        1.5 表達載體構建
        1.6 擬南芥的遺傳轉化及GUS染色
        1.7 基因的組織表達分析
        1.8 數據處理
    2 結果與分析
        2.1 STM與 CUC2 基因在不同組織中的表達
            2.1.1 常溫下STM與 CUC2 基因在不同組織中的表達
            2.1.2 低溫脅迫下STM與 CUC2 在各組織中的表達分析
        2.2 STM啟動子功能分析
            2.2.1 STM啟動子克隆
            2.2.2 STM啟動子順式作用元件分析
        2.3 CUC2啟動子功能分析
            2.3.1 CUC2啟動子克隆
            2.3.2 CUC2啟動子順式作用元件分析
            2.3.3 CUC2基因的組織定位
    3 討論
    4 結論
第五章 白菜型冬油菜生長錐STM、CUC2 基因的遺傳轉化及功能分析
    1 材料與方法
        1.1 試驗材料
            1.1.1 植物材料
            1.1.2 藥品及試劑材料
        1.2 試驗方法
            1.2.1 植物過表達載體構建
            1.2.2 擬南芥的遺傳轉化
            1.2.3 轉基因抗性植株的篩選
            1.2.4 轉基因抗性植株的鑒定
        1.3 轉基因擬南芥功能分析
            1.3.1 轉基因擬南芥的表型觀察
            1.3.2 低溫處理后轉基因擬南芥的耐寒性分析
            1.3.3 轉基因擬南芥低溫處理后生理指標的測定
        1.4 數據處理
    2 結果與分析
        2.1 轉STM基因過表擬南芥的篩選及鑒定
            2.1.1 轉STM基因過表擬南芥的篩選
            2.1.2 轉STM基因過表達擬南芥基因組DNA PCR鑒定
            2.1.3 轉STM基因過表達植株RT-PCR鑒定
        2.2 轉STM基因過表達擬南芥功能分析
            2.2.1 轉STM基因過表達擬南芥表型觀察
            2.2.2 低溫處理后轉STM基因過表達植株的表型分析
            2.2.3 低溫處理后轉STM基因過表達植株的存活率分析
            2.2.4 低溫處理后轉STM基因過表達植株生理生化指標的測定
        2.3 轉CUC2基因過表擬南芥的篩選及鑒定
            2.3.1 轉CUC2基因過表擬南芥的篩選
            2.3.2 轉CUC2 基因過表達擬南芥基因組DNA PCR鑒定
            2.3.3 轉CUC2 基因過表達植株RT-PCR鑒定
        2.4 轉CUC2基因過表達擬南芥功能分析
            2.4.1 轉CUC2基因過表達擬南芥表型觀察
            2.4.2 低溫處理后轉CUC2基因過表達植株的表型分析
            2.4.3 低溫處理后轉CUC2基因過表達植株的存活率分析
            2.4.4 低溫處理后轉CUC2基因過表達植株生理生化指標的測定
    3 討論
    4 結論
第六章 全文結論
參考文獻
致謝
作者簡介
在讀期間發(fā)表論文和研究成果等
導師簡介


【參考文獻】：
期刊論文
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[8]白菜型冬油菜生物學特性及根部蛋白質表達對低溫脅迫的響應[D]. 張朋飛.甘肅農業(yè)大學 2011
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本文編號：3042542