水稻ALOG（Arabidopsis LSH1 and Oryza G1）基因家族有10個成員（G1,G1L1～G1L9）,其中已有三個基因G1、G1L5和G1L6被報道有功能,它們通過不同方式參與水稻小穗花發(fā)育過程,除此之外其它水稻ALOG家族成員的基因功能未被闡明。本實驗著重研究除G1,G1L5和G1L6之外的ALOG家族成員基因的功能,并在此基礎(chǔ)上研究G1L1參與水稻柱頭發(fā)育的機制。該研究運用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)敲除ALOG基因全部成員,獲得它們敲除植株,并構(gòu)建除G1,G1L5和G1L6之外的其他7個成員的過表達系。通過觀察,除已被報道的有表型外其他敲除系與過表達系未出現(xiàn)表型。由于ALOG成員之間序列相似,因此推測其功能存在冗余,因此,單獨敲除這7個基因可能不會引起發(fā)育上的缺陷。我們通過嵌合抑制基因沉默技術(shù)（CRES-T）,研究這些基因的冗余性。具體來說就是將某一個轉(zhuǎn)錄因子與EAR-motif抑制域（SRDX）融合（末端增加12個氨基酸）,使得融合蛋白競爭性地結(jié)合該轉(zhuǎn)錄因子及其冗余因子的調(diào)控區(qū)域,從而起到抑制該轉(zhuǎn)錄因子及其冗余因子的作用。我們構(gòu)建了G1I1和G1L3... 

【文章來源】：廣西大學廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
    1.1 轉(zhuǎn)錄因子介紹
    1.2 ALOG基因家族研究現(xiàn)狀
        1.2.1 ALOG基因在擬南芥中研究狀況
        1.2.2 ALOG家族在水稻中功能
    1.3 水稻花發(fā)育模式
        1.3.1 花發(fā)育的ABC模型
        1.3.2 水稻花發(fā)育方式
    1.4 柱頭的介紹
    1.5 水稻花結(jié)構(gòu)及花發(fā)育研究意義
    1.6 技術(shù)路線
第二章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 研究材料
        2.1.2 引物合成與測序
        2.1.3 實驗使用的菌株和質(zhì)粒
        2.1.4 實驗用酶
        2.1.5 實驗使用得試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 酵母自激活載體構(gòu)建
        2.2.2 轉(zhuǎn)基因植株鑒定方法
        2.2.3 水稻ALOG基因家族嵌合抑制基因沉默載體構(gòu)建
        2.2.4 試驗材料的培養(yǎng)方法
        2.2.5 水稻原生質(zhì)體制備及亞細胞定位方法
        2.2.6 GUS染色方法
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 ALOG基因單基因敲除植株及過表達植株表型觀察
    3.2 OX-GIL/-SRDX植株的構(gòu)建及表型分析
        3.2.1 OX-G1L1-SRDX載體構(gòu)建
        3.2.2 OX-G1L1-SRDX轉(zhuǎn)基因植株表型分析
    3.3 G1L1亞細胞定位
    3.4 G1L1轉(zhuǎn)錄活性分析
    3.5 G1L1的空間表達
    3.6 未被報道的ALOG基因家族突變體柱頭發(fā)育缺陷表型觀察
    3.7 G1L7亞細胞定位及轉(zhuǎn)錄活性分析
        3.7.1 G1L7亞細胞定位
        3.7.2 G1L7轉(zhuǎn)錄活性檢測
    3.8 ALOG突變體之間雜交植株F1代表型分析
    3.9 已報道AL0G基因新表型分析
    3.10 OX-G7ZJ-SRDX植株表型分析
第四章 討論
    4.1 ALOG基因敲除植株和過表達植株的表性分析
    4.2 嵌合抑制基因沉默技術(shù)（CRES-T）對研究ALOG基因功能的影響
    4.3 G1L1的功能分析
    4.4 ALOG基因參與水稻柱頭的發(fā)育
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻
附錄1
附錄2
致謝
攻讀碩士學位期間發(fā)表論文情況


【參考文獻】：
期刊論文
[1]植物干細胞中WUS/CLV反饋調(diào)控機制的研究進展[J]. 王占軍,陳金慧,施季森.  林業(yè)科學. 2011(04)
[2]水稻花器官發(fā)育基因的研究進展[J]. 劉堅,郭龍彪,錢前.  中國稻米. 2007(03)
[3]花器官發(fā)育的ABC模型研究進展[J]. 王彬,吳先軍,謝兆輝,韓贊平,牟春紅,汪旭東.  中國農(nóng)學通報. 2003(05)



本文編號：3035106