類黃酮是在植物中普遍存在的一類天然次生代謝產物,對植物自身起著非常重要的作用。有研究發(fā)現(xiàn),類黃酮具有抗癌、抗氧化、抗菌等功能,因此類黃酮對于人類具有重要的保健功能。同時,類黃酮類化合物能夠明顯增強植物的抗逆境脅迫能力。類黃酮在植物體內主要以結合態(tài)（黃酮糖苷）或自由態(tài)（黃酮苷元）形式存在。糖基轉移酶是一類向受體添加糖基,催化糖和受體形成糖苷鍵的酶類,糖基化修飾調節(jié)了生物分子的活性、穩(wěn)定性、水溶性等。水稻中的糖基轉移酶成員眾多,但多數成員的功能尚不清楚。本論文主要針對水稻中黃酮和花青素的糖基化修飾,鑒定相關的糖基轉移酶基因,分析它們的功能作用,為水稻的營養(yǎng)品質改良和抗逆育種奠定理論基礎。本論文的主要研究內容及結果如下:1、水稻黃酮糖基轉移酶基因UGT40的鑒定和作用分析根據公開發(fā)表的基因芯片數據,我們選擇了一批水稻糖基轉移酶的候選基因,對它們進行了克隆、原核表達和蛋白純化。通過生化分析發(fā)現(xiàn),糖基轉移酶基因UGT40的編碼產物能夠糖基化修飾黃酮類物質槲皮素、山萘酚、柚皮素等。為了進一步檢測UGT40的功能作用,我們將該基因轉入擬南芥,在模式植物中驗證該基因的功能。首先,獲得了 UGT40的過... 

【文章來源】：山東大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１糖基轉移酶的ＰＳＰＧ盒序列

?｜?ｔｔ１８?＿丄?１７６１??Ａｎｔｎｏｃｙａｎｉｎｓ?Ｍ?Ａｎｔｎｏｃｙａｎｗｉｎｓ?（ｒ２Ｒ３＾ｙｂ）?ｕｈｌｈ?；??ＡＮＲ｜Ｄａｎ??Ｐｒｏａｎｔｎｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ?？—?Ｆｉａｖａｎ－３〇ｌｓ??Ａｎｍｏｃｙａｎｌｎｃ：?Ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙ?卻丨?ｄｌｎ？：??－Ｒ２Ｒ３４ＩＹＢ：?ＰＡＦ１，?ＰＡＰ２，?ＷＹＢ１１３?ａｎｄ?ＭＹＢ１１４?－?Ｒ２Ｒ３－ＷＹＢ：?ＴＴ２??－ＢＨＬＭ：?ＧＬ３，?ＥＧＬ３?ａｎｄ?ＴＴ８?－?ＤＨＬＨ：?ＴＴ８??圖１－２黃酮代謝途徑（Ｄｕｂｏｓ?ｅｔａｌ．，?２００８）??２．２植物體內類黃酮化合物的生物學功能??類黃酮化合物在植物的整個生長發(fā)育的過程中有著至關重要的作用，同時對??人體健康有益，營養(yǎng)價值極高。根據己有的文獻證明，類黃酮化合物主要有以下??幾方面的作用。第一，類黃酮化合物參與植物對生物脅迫和非生物脅迫的抗性反??應（Ｌｉ?ｅｔ?ａｌ．，２０２０）。Ｒｉｇｈｉｎｉ等通過構建表達各的擬南芥轉基因植株，驗證??了黃酮在植物抗?ＵＶ－Ｂ?輻射中的作用（Ｔｓａｉ?ｅｔ?ａｌ．，２０１２）。ＺｍＣＹＰ９３Ｇ７?（ＦＮＳＩＩ）??１２??

移酶基因Ｃ／Ｇ７＾的蛋白表達純化及底物鑒定??３．１．１?ｔ／Ｇ爾的ＰＣＲ擴增??可公開獲得的基因芯片數據顯示，（ｔ／ＧＭＯ）可能屬于黃酮類化??合物的糖基轉移酶基因，并被干旱誘導表達，因此我們進行了關于｛／Ｇ７￥６＞的功??能研宄實驗。查找水稻基因組數據庫網站（ｈｔｔｐｓ：／／ｍｐｄｂ．ｄｎａ．ａｆｆｉｃ．ｇｏ．ｊｐ／）中有關??呢１４０的基因序列，并設計引物，利用高保真酶進行ＰＣＲ擴增獲得目的基因（圖??３－１）。??Ｍ?１?２??４ｔｔ｜??ｍ—ｉ５〇６ｂｐ??ｍ??圖３－１?基因的擴增??Ｍ：?ＤＮＡｍａｒｋｅｒ；?１－２：?Ｗ７Ｔ４０?基因的?ｃＤＮＡ?擴增條帶。??３．１．２構建ｆ／Ｇ爾基因的原核表達載體??將目的基因先連接到中間載體。然后雙酶切獲得目的基因，與經過??相同酶切的ＰＧＥＸ－３Ｈ載體連接，獲得原核表達載體。構建好的載體轉化大腸桿??菌ＤＨ５ｃｘ，挑取斑點，進行菌液ＰＣＲ驗證及酶切驗證（圖３－２），并送測序。驗??證正確的質粒轉化ＢＬ２１，陽性菌株經ＰＣＲ驗證。驗證正確的菌株可放于－８０°Ｃ??２５??


本文編號：3034337