轉(zhuǎn)基因安全管理和標(biāo)識制度的實(shí)施需要標(biāo)準(zhǔn)化的檢測方法和轉(zhuǎn)基因檢測標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是獲得準(zhǔn)確、可靠、可比檢測結(jié)果的保證。轉(zhuǎn)基因大豆MON87751已被我國批準(zhǔn)進(jìn)口用作加工原料,因此轉(zhuǎn)基因大豆MON87751的安全監(jiān)管亟需制備標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。本研究優(yōu)化了MON87751的數(shù)字PCR定值方法,并組織9家實(shí)驗(yàn)室對本課題前期研制的MON87751標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行了聯(lián)合定值。定值結(jié)果,MON87751標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的量值達(dá)到1.002 2,相對不確定度為0.011（copy/copy）,滿足實(shí)際的檢測需求。 

【文章來源】：植物檢疫. 2020,34(06)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

MON87751/Lectin二重數(shù)字PCR特異性檢測擴(kuò)增圖

微滴式數(shù)字PCR的理論有效線性范圍是1～120 000 copies,2μL反應(yīng)液在微滴生成器中只能產(chǎn)生12 000～16 000個有效微滴，微滴數(shù)大于10 000為有效反應(yīng)。為了測試二重數(shù)字PCR系統(tǒng)的動力學(xué)范圍，將MON87751基因組DNA稀釋，加入反應(yīng)體系中的模板量分別為1.145 1×104、2.290 2×103、4.580 4×102、9.160 9×101、1.832 2×101和3.6 copies。微滴數(shù)字PCR的測量值分別為11 470、2 300、456、88、20和9 copies。分析預(yù)期值和測量值的相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，當(dāng)模板量在20～11 400 copies之間時，通過微滴數(shù)字PCR獲得的測量值與預(yù)期拷貝數(shù)濃度間具有良好的相關(guān)性，線性回歸方程為y=1.015 7x，決定系數(shù)R2值等于0.988（圖2）；而拷貝數(shù)濃度低至4copies/μL，測量值偏離預(yù)期值。根據(jù)數(shù)字PCR的動力學(xué)范圍測定結(jié)果，當(dāng)DNA濃度在20～11 400copies/μL之間，定量結(jié)果準(zhǔn)確可靠。因此，在本項(xiàng)目中推薦配置數(shù)字PCR反應(yīng)體系前，將基因組DNA稀釋到100～5 000 copies/μL之間，加2μL DNA溶液到數(shù)字PCR反應(yīng)體系中，使初始模板量在200～10 000 copies，可獲得穩(wěn)定、可靠的檢測結(jié)果。2.2.3 數(shù)字PCR的穩(wěn)定性良好

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)量值一致性研究進(jìn)展[J]. 王顥潛,李夏瑩,張麗,趙新,陳銳,陳笑蕓,高芳瑞,蘭青闊,王永,張秀杰.  生物技術(shù)通報. 2020(05)
[2]轉(zhuǎn)基因作物發(fā)展及應(yīng)用概述[J]. 沈平,武玉花,梁晉剛,盧新,章秋艷,王顥潛,劉鵬程.  中國生物工程雜志. 2017(01)
[3]轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定值和不確定度研究進(jìn)展[J]. 張麗,吳剛,武玉花,沈平,宋貴文,周云龍.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2014(03)



本文編號：3033640