人參（Panax ginseng C.A.Meyer）是我國傳統(tǒng)的名貴中草藥,為五加科多年生草本藥用植物,具有非常高的藥用價值和經濟價值。東北是人參的重要產區(qū),灰葡萄孢可以侵染人參葉片、葉柄、花和果實,嚴重時還會侵染人參的莖和根。目前,人參灰霉病已經成為影響人參產業(yè)持續(xù)健康發(fā)展的主要危害之一。BcGP基因編碼谷氨酰胺轉移酶,谷氨酰胺轉移酶在自然界分布廣泛,目前該酶主要來源是微生物,主要應用在食品工業(yè)用于改善食品蛋白質結構,也有報道該酶與人類疾病相關（包括腫瘤、自身免疫疾病、皮膚病、神經退行疾病等）,但目前未見有關該酶在灰葡萄孢致病過程中的作用的報道。本論文通過對BcGP基因研究,得到了如下結果:1、對BcGP基因進行了克隆和生物信息學分析,發(fā)現BcGP基因全長781 bp,含有三個外顯子和兩個內含子,其開放閱讀框長681bp,編碼226個氨基酸,有5個結構域,在進化上具有保守性。2、通過農桿菌介導的遺傳轉化的方法得到了BcGP基因的敲除突變體ΔBcGP和回補轉化子ΔBcGP/GP,并通過相應的抗性篩選、PCR驗證和qRT-PCR檢測驗證了敲除子和互補子。3、ΔBcGP的菌落生長速度略快... 

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【部分圖文】：

灰霉病癥狀

第一章緒論4圖1.2灰葡萄孢生活史及相關癥狀（引自Fillinger&Elad.,2016）Fig.1.2LifecycleofB.cinereaandassociatedsymptoms(Fillinger&Elad.,2016)隨著對灰葡萄孢分子研究的深入，包括對兩株灰葡萄孢的全基因組測序和分析，灰葡萄孢在感染過程中使用的分子策略已經大致概括出一個模型：一個復雜的信號網絡調節(jié)大量蛋白質和植物毒性次生代謝物的分泌，這些是灰葡萄孢侵染寄主所必需的。此外，植物過敏反應（Hypersensitiveresponse,HR），是一種程序性細胞死亡（Programmedcelldeath,PCD）的形式，在灰葡萄孢的致病策略中起著重要作用［25］。死體營養(yǎng)型病原菌大致可分為兩種，一種為宿主特異性腐生菌，其分泌的毒素若能被宿主識別，便能激活宿主的細胞程序性死亡過程從而特異侵染該宿主，反之若毒素不被識別，便不可以入侵宿主；另一種為廣泛宿主型腐生菌，其致病的機理不同于前一種，并且相對于前一種其機理更為復雜［39］�；移咸焰咦鳛橐环N典型的死體營養(yǎng)型病原菌，在研究其毒力策略時的基本原則包括利用死因子和PCD誘導毒力因子中的一種或兩種快速殺死宿主組織［40］。當灰葡萄孢侵入寄主植物后，會致使寄主植物細胞死亡，這個過程包括一些誘導寄主植物細胞程序死亡（PCD），這一過程有利于灰霉菌的進一步侵染，這可能是灰霉病原菌初期侵染成功的必要因素之一。致死誘導因子在感染早期是必不可少的，而PCD誘導因子在感染后期可能更為豐富［41］。在侵染擬南芥和番茄時，植物的過敏性壞死反應是發(fā)揮灰葡萄孢致病性的必要因素之一［42］。

??62-64］，從而催化蛋白質或多肽分子間形成共價交聯(lián)及蛋白質分子內谷氨酰胺基的水解，形成分子內和分子間的網狀結構，進而改善蛋白質的結構和功能特性甚至帶來新的功能。谷氨酰胺轉胺酶以肽鏈中谷氨酰胺殘基的γ-羧酰胺基作為�；w，而�；荏w可以有多種受體，包括多肽鏈中賴氨酸殘基的ε-氨基、伯胺基和水等。其中，當水充當為�；荏w時，谷氨酰胺轉移會促使谷氨酰胺殘基發(fā)生水解，使之脫酰胺，生成谷氨酸和氨，谷氨酸可再參與生物體中其他生化反應，該反應可以改變蛋白的等電點和溶解度，進而改變蛋白的性質（如圖1.3③）。除上文所述之外，該酶也可以直接將谷氨酰胺分解為谷氨酸和氨［62］。近些年來，谷氨酰胺轉移酶在食品、工業(yè)、農業(yè)、生物醫(yī)藥、紡織和化妝品等諸多領域都有廣泛的應用［65-67］。圖1.3谷氨酰胺轉胺移的催化反應（引自Wang&Liu.,2010）Fig.1.3Catalyticreactionoftransglutaminase(Wang&Liu.,2010)谷氨酰胺（Glutamine,GLN）是人體循環(huán)系統(tǒng)和氨基酸庫中含量最豐富的非必需氨基酸。谷氨酰胺也被證明是一種條件必需氨基酸，在損傷反應中起重要作用。谷氨酰胺還可以維持生物體內的酸堿平衡，維持胃、腸上皮的功能和形態(tài)，維護組織中抗氧化劑的儲存量，增強免疫應答，增強宿主防御能力。標準腸外營養(yǎng)對照（Standardparenteralnutrition,STD）補充谷氨酰胺能顯著增加谷胱甘肽（Glutathione,GSH）的儲備，提高損傷動物模型的存活率，因此谷氨酰胺在各種抗損傷過程中發(fā)揮重要作用［68］。谷胱甘肽（GSH）是一種由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸組成的三肽，是生物體內一種重要的抗氧化劑，是宿主防御系統(tǒng)的重要組成部分。谷胱甘肽可以通過增強谷胱甘肽前體

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]人參根腐病、銹腐病病原菌分析及其拮抗菌的篩選與鑒定[D]. 陳德國.吉林農業(yè)大學 2019
[2]稻瘟菌核糖體蛋白L21（Rpl21）的生物功能分析[D]. 王艷艷.吉林大學 2018
[3]人參灰霉病病原學及其致病機制研究[D]. 袁月.沈陽農業(yè)大學 2016
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本文編號：3030902