目的對細粒棘球絳蟲轉(zhuǎn)醛醇酶（Echinococcus granulosus transaldolase,EgTAL）編碼基因進行生物信息學分析、克隆和表達,并對其作為藥物靶標及其潛在的免疫診斷價值進行初步評價。方法運用多種軟件分析EgTAL的理化性質(zhì)、保守功能域、同源性和三級結(jié)構(gòu)等。從重組質(zhì)粒pBluescript ⅡSK Egtal中PCR擴增Egtal基因,克隆至pET30a,構(gòu)建表達載體pET30a-Egtal,轉(zhuǎn)化大腸埃希菌（Escherichia coli）BL21（DE3）,異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）誘導表達,十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）分析表達產(chǎn)物,抗His標簽鎳親和層析柱純化重組蛋白EgTAL,與細粒棘球蚴病患者血清進行蛋白質(zhì)印跡（Western blotting）分析。用20份已確診的細粒棘球蚴病患者血清和20份健康者血清,ELISA法評價重組蛋白EgTAL的免疫診斷效果。分光光度法檢測重組蛋白EgTAL的酶活性。結(jié)果 Egtal基因長981 bp,編碼的蛋白含326個氨基酸,理論相對分子質(zhì)量（M_r）為36... 

【文章來源】：中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志. 2017,35(04)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌株、質(zhì)粒、血清
    1.2 主要試劑
    1.3 Eg TAL生物信息學分析
    1.4 引物設計及合成
    1.5 Egtal基因的克隆及重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.6 Eg TAL的原核表達及純化
    1.7 Eg TAL的蛋白質(zhì)印跡 （Western blotting） 分析
    1.8 Eg TAL的ELISA檢測
    1.9 Eg TAL的酶活性檢測
2 結(jié)果
    2.1 生物信息學分析結(jié)果
        2.1.1 Eg TAL理化性質(zhì)分析
        2.1.2 保守功能域、跨膜區(qū)、信號肽預測
        2.1.3 序列同源性及分子進化樹分析
        2.1.4 三級結(jié)構(gòu)分子建模分析
    2.2 Egtal的擴增、重組表達質(zhì)粒的鑒定
    2.3 Eg TAL的表達、純化及Western blotting分析
    2.4 重組蛋白Eg TAL的ELISA檢測
    2.5 重組蛋白Eg TAL酶活性測定
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3030269