肉堿脂酰轉移酶CAT是與附著胞的形成緊密相關的一類酶,與辣椒疫霉菌的致病性密切相關。該研究基于辣椒疫霉菌全基因組序列,以辣椒疫霉高致病菌株SD33全基因組DNA為試材擴增CAT基因,采用了原核表達方法誘導表達重組蛋白6×His-CAT,并對重組蛋白進行親和層析純化、分子排阻層析純化及蛋白結晶試驗,以期獲得純蛋白及蛋白晶體。結果表明:經上述方法所獲蛋白具有較高的純度,且有較好的結晶性能,為進一步闡明CAT作用機理奠定基礎。 

【文章來源】：北方園藝. 2020,(11)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

二次分子排阻層析純化重組蛋白6×His-CAT

純蛋白6×His-CAT的結晶

將測序驗證后的CAT基因與表達載體pET28a(+)連接轉化E.coli BL21 (DE3)表達菌株,菌液經不同濃度IPTG誘導,以空載體原核表達產物為陰性對照,通過SDS-PAGE電泳檢測重組蛋白6×His-CAT表達情況,發(fā)現(xiàn)在70 kDa左右出現(xiàn)一條明顯的蛋白條帶(圖1),且不同濃度IPTG對重組蛋白表達量影響不明顯,最終確定的誘導條件為0.1 mmol·L-1的IPTG,16 ℃下誘導20 h左右收集菌液,1 L菌液中大約收集4 g左右的菌體。圖2 重組蛋白6×His-CAT的親和層析純化

【參考文獻】：
期刊論文
[1]辣椒輕斑駁病毒葫蘆島分離物RNA雜交檢測體系的建立[J]. 周濤,于曼,張鑫宇,安夢楠,吳元華.  中國植保導刊. 2018(12)
[2]生物殺菌劑REMEDIER與嘧菌酯混配對辣椒疫病的防治效果[J]. 劉榮云,繆武,董亞靜,孫佳杰,楊石奇.  湖南農業(yè)科學. 2018(10)
[3]黃瓜霜霉病的研究進展及登記防治農藥的分析[J]. 陳永明,谷莉莉,林雙喜,王蘋,丁蕾,吳樹靜.  農學學報. 2018(08)
[4]枯草芽孢桿菌C-D6對辣椒炭疽菌附著胞形成的抑制作用研究[J]. 曾大興,張曉陽,賈書娟,喇文軍,涂國全.  微生物學通報. 2015(12)
[5]稻瘟菌附著胞形成和發(fā)育的研究進展[J]. 彭陳,陳洪亮,張玉瓊,郭士偉.  微生物學通報. 2011(08)
[6]植物病原真菌附著胞的機械穿透力[J]. 王洪凱,林福呈,王政逸.  菌物學報. 2004(01)



本文編號：3026169