肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶CAT是與附著胞的形成緊密相關(guān)的一類酶,與辣椒疫霉菌的致病性密切相關(guān)。該研究基于辣椒疫霉菌全基因組序列,以辣椒疫霉高致病菌株SD33全基因組DNA為試材擴(kuò)增CAT基因,采用了原核表達(dá)方法誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白6×His-CAT,并對重組蛋白進(jìn)行親和層析純化、分子排阻層析純化及蛋白結(jié)晶試驗(yàn),以期獲得純蛋白及蛋白晶體。結(jié)果表明:經(jīng)上述方法所獲蛋白具有較高的純度,且有較好的結(jié)晶性能,為進(jìn)一步闡明CAT作用機(jī)理奠定基礎(chǔ)。 

【文章來源】：北方園藝. 2020,(11)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

二次分子排阻層析純化重組蛋白6×His-CAT

純蛋白6×His-CAT的結(jié)晶

將測序驗(yàn)證后的CAT基因與表達(dá)載體pET28a(+)連接轉(zhuǎn)化E.coli BL21 (DE3)表達(dá)菌株,菌液經(jīng)不同濃度IPTG誘導(dǎo),以空載體原核表達(dá)產(chǎn)物為陰性對照,通過SDS-PAGE電泳檢測重組蛋白6×His-CAT表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)在70 kDa左右出現(xiàn)一條明顯的蛋白條帶(圖1),且不同濃度IPTG對重組蛋白表達(dá)量影響不明顯,最終確定的誘導(dǎo)條件為0.1 mmol·L-1的IPTG,16 ℃下誘導(dǎo)20 h左右收集菌液,1 L菌液中大約收集4 g左右的菌體。圖2 重組蛋白6×His-CAT的親和層析純化

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3026169