【背景】整合子在細(xì)菌耐藥性的獲得及傳播中占據(jù)重要地位,對(duì)于整合反應(yīng)檢測(cè)方法的改良及反應(yīng)機(jī)制的研究,可以加深我們對(duì)細(xì)菌耐藥性產(chǎn)生和播散的理解,為遏制耐藥菌株的產(chǎn)生和播散提供新的途徑�！灸康摹吭诩�(xì)菌染色體上構(gòu)建第1類整合子反應(yīng)模型,用于評(píng)價(jià)整合酶介導(dǎo)的基因盒位點(diǎn)特異性重組�！痉椒ā坎捎肞CR分別擴(kuò)增含氯霉素耐藥基因cat的CM片段、含基因盒aadA5的LacA5片段、含整合子重組位點(diǎn)attI1及強(qiáng)可變區(qū)啟動(dòng)子的PcS片段和插入位點(diǎn)兩側(cè)的同源臂,重疊延伸聚合酶鏈反應(yīng)連接上述5個(gè)片段制備整合子模型插入片段,通過(guò)同源重組將構(gòu)建好的整合子模型片段插入大腸埃希菌JM109染色體中。轉(zhuǎn)入高表達(dá)第1類整合酶的質(zhì)粒pHSint,在鏈霉素平板上篩選發(fā)生整合的菌株,并用聚合酶鏈反應(yīng)和測(cè)序驗(yàn)證�！窘Y(jié)果】構(gòu)建的整合子模型片段經(jīng)測(cè)序與預(yù)期一致,整合子模型片段成功插入大腸埃希菌JM109染色體中。轉(zhuǎn)入高表達(dá)整合酶的質(zhì)粒pHSint后,在鏈霉素平板上成功篩選出基因盒aadA5發(fā)生整合的菌株,經(jīng)聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增并測(cè)序與預(yù)期一致�！窘Y(jié)論】在大腸埃希菌染色體上成功構(gòu)建第1類整合酶介導(dǎo)基因盒位點(diǎn)特異性重組反應(yīng)模型,為進(jìn)一步揭示... 

【文章來(lái)源】：微生物學(xué)通報(bào). 2020,47(11)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌株和質(zhì)粒
    1.2 主要試劑和儀器
    1.3 PCR擴(kuò)增構(gòu)建模型的單個(gè)DNA片段
    1.4 重疊延伸PCR連接5個(gè)單片段
    1.5 通過(guò)同源重組將UCAPSD片段插入大腸埃希菌JM109染色體中
    1.6 插入成功菌株的鑒定
    1.7 鏈霉素平板篩選發(fā)生整合的菌株
    1.8 通過(guò)PCR和測(cè)序驗(yàn)證發(fā)生整合的菌株
2 結(jié)果與分析
    2.1 UCAPSD打靶片段的構(gòu)建
    2.2 插入菌株CLJM109Ⅰ的驗(yàn)證
    2.3 整合菌株的鑒定
3 討論與結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]臨床分離變形桿菌不典型第1類整合子結(jié)構(gòu)分析[J]. 魏取好,肖林林,胡慶豐,李萬(wàn)翔,劉維薇.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2018 (06)



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