萼花臂尾輪蟲（Brachionus calyciflorus Pallas）隸屬于輪蟲動(dòng)物門（Rotifera）,單巢綱（Monogononta）,游泳目（Ploima）,臂尾輪蟲科（Brachionidae）,是最常見的淡水浮游動(dòng)物。由于其個(gè)體�。s100-500μm）、生命周期短（5-7d）、并且在實(shí)驗(yàn)室易于培養(yǎng)、衰老特征明顯等特性,被認(rèn)為是極具潛在價(jià)值的衰老生物學(xué)研究的模式生物之一。mTOR是一種高分子量的蛋白激酶,其響應(yīng)細(xì)胞內(nèi)的許多調(diào)節(jié)過程,包括有絲分裂及養(yǎng)分供應(yīng),其中S6K和S6基因?yàn)門OR信號(hào)通路的下游底物。而熱休克蛋白（HSPs）是一種小分子量蛋白,在機(jī)體受到脅迫時(shí)被誘導(dǎo)并出現(xiàn)應(yīng)激效應(yīng)。mTOR的磷酸化可促進(jìn)HSP70伴侶復(fù)合物的釋放,同時(shí)伴隨著合成熱休克蛋白的能力大幅度下降。但二者間的調(diào)節(jié)機(jī)制及其相互作用在輪蟲衰老過程中的作用尚鮮有報(bào)道。本文通過研究不同溫度對(duì)萼花臂尾輪蟲（B.calyciflorus）壽命,生殖量和生殖前期及生殖后期的影響;克隆TOR、S6K、S6和HSP70基因片段,并在不同溫度不同時(shí)間處理后研究溫度對(duì)其基因表達(dá)量的影響,以及研究高溫和低溫不同時(shí)間處... 

【文章來源】：南京師范大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

單巣綱輪蟲的生活史Fig1.1Thelifehistorymodelofmonogonontarotifers

圖 1.2 mTOR 蛋白組成結(jié)構(gòu)注釋：從左到右依次是，N 端有 12-20 個(gè)氨基酸組成介導(dǎo)蛋白互作的 HEAT repeat dom結(jié)構(gòu)域、FAT 結(jié)構(gòu)域（focal adhesion targeting domain）、FRB 結(jié)構(gòu)域（FKBP12-rapambinding domain）和 C 末端的激酶結(jié)構(gòu)域、FATC 結(jié)構(gòu)域（focal adhesion targeting domaC-terminal domain）Figure 1.1 The structure of mTOR proteinPs: from left to right, HEAT repeat domain, focal adhesion targeting domain, FBP12-rapambinding, which is composed by 12-20 amino acids, domain and C-terminal kinase domain afocal adhesion targeting domain of C-terminal domain對(duì)酵母的研究表明，TOR 蛋白在生物體內(nèi)發(fā)揮著兩種基本功能; 一種是細(xì)胞生長，另一種是調(diào)節(jié)細(xì)胞生長的位置[38]。當(dāng)生長條件有利時(shí)，TOR 蛋較活躍，酵母細(xì)胞維持核糖體的生物發(fā)生、翻譯起始和營養(yǎng)導(dǎo)入的速率大。而，用雷帕霉素處理的快速生長的酵母細(xì)胞，由于缺乏氮或缺乏 TOR1 和 T都會(huì)顯著下調(diào)一般蛋白質(zhì)的合成，上調(diào)巨噬細(xì)胞的自噬作用，并激活血清應(yīng)應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子。因此，當(dāng)生長條件允許時(shí)，雷帕霉素敏感的 TOR 信號(hào)傳導(dǎo)會(huì)

第 3 章 溫度對(duì)萼花臂尾輪蟲 TOR，S6K 和 S6 與 HSP70 基因表達(dá)量的影響提取輪蟲的總 RNA 之后，我們需要對(duì)提取的輪蟲 RNA 質(zhì)量進(jìn)行檢測。將新提取的全部 RNA 用 DEPC 水稀釋 50-100，然后用分光光度儀測定其在 260nm和 280nm 處的吸光值，因?yàn)?RNA 易降解的特性，所以整個(gè)過程都需要在冰上進(jìn)行。OD260/OD280 正常值范圍在 1.8-2.1 之間。如果實(shí)驗(yàn)所測得的比值大于 2.1，則 RNA 在提取過程中收到了一定的降解；如果實(shí)驗(yàn)所測得的比值小于 1.8，則表明輪蟲的RNA提取過程受到了蛋白質(zhì)或者DNA的污染。在電泳圖中，若28sRNA與 18sRNA 條帶的亮度比為 2:1（如圖 3.1），則可認(rèn)為所提取的萼花臂尾輪蟲的RNA 純度較高，即沒有被降解。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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