溫度對萼花臂尾輪蟲衰老過程中相關基因表達特征研究
發(fā)布時間：2021-02-04 16:40
萼花臂尾輪蟲（Brachionus calyciflorus Pallas）隸屬于輪蟲動物門（Rotifera）,單巢綱（Monogononta）,游泳目（Ploima）,臂尾輪蟲科（Brachionidae）,是最常見的淡水浮游動物。由于其個體�。s100-500μm）、生命周期短（5-7d）、并且在實驗室易于培養(yǎng)、衰老特征明顯等特性,被認為是極具潛在價值的衰老生物學研究的模式生物之一。mTOR是一種高分子量的蛋白激酶,其響應細胞內的許多調節(jié)過程,包括有絲分裂及養(yǎng)分供應,其中S6K和S6基因為TOR信號通路的下游底物。而熱休克蛋白（HSPs）是一種小分子量蛋白,在機體受到脅迫時被誘導并出現(xiàn)應激效應。mTOR的磷酸化可促進HSP70伴侶復合物的釋放,同時伴隨著合成熱休克蛋白的能力大幅度下降。但二者間的調節(jié)機制及其相互作用在輪蟲衰老過程中的作用尚鮮有報道。本文通過研究不同溫度對萼花臂尾輪蟲（B.calyciflorus）壽命,生殖量和生殖前期及生殖后期的影響;克隆TOR、S6K、S6和HSP70基因片段,并在不同溫度不同時間處理后研究溫度對其基因表達量的影響,以及研究高溫和低溫不同時間處...
【文章來源】：南京師范大學江蘇省 211工程院校
【文章頁數(shù)】：70 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
單巣綱輪蟲的生活史Fig1.1Thelifehistorymodelofmonogonontarotifers
圖 1.2 mTOR 蛋白組成結構注釋：從左到右依次是，N 端有 12-20 個氨基酸組成介導蛋白互作的 HEAT repeat dom結構域、FAT 結構域（focal adhesion targeting domain）、FRB 結構域（FKBP12-rapambinding domain）和 C 末端的激酶結構域、FATC 結構域（focal adhesion targeting domaC-terminal domain）Figure 1.1 The structure of mTOR proteinPs: from left to right, HEAT repeat domain, focal adhesion targeting domain, FBP12-rapambinding, which is composed by 12-20 amino acids, domain and C-terminal kinase domain afocal adhesion targeting domain of C-terminal domain對酵母的研究表明，TOR 蛋白在生物體內發(fā)揮著兩種基本功能; 一種是細胞生長，另一種是調節(jié)細胞生長的位置[38]。當生長條件有利時，TOR 蛋較活躍，酵母細胞維持核糖體的生物發(fā)生、翻譯起始和營養(yǎng)導入的速率大。而，用雷帕霉素處理的快速生長的酵母細胞，由于缺乏氮或缺乏 TOR1 和 T都會顯著下調一般蛋白質的合成，上調巨噬細胞的自噬作用，并激活血清應應轉錄因子。因此，當生長條件允許時，雷帕霉素敏感的 TOR 信號傳導會
第 3 章 溫度對萼花臂尾輪蟲 TOR，S6K 和 S6 與 HSP70 基因表達量的影響提取輪蟲的總 RNA 之后，我們需要對提取的輪蟲 RNA 質量進行檢測。將新提取的全部 RNA 用 DEPC 水稀釋 50-100，然后用分光光度儀測定其在 260nm和 280nm 處的吸光值，因為 RNA 易降解的特性，所以整個過程都需要在冰上進行。OD260/OD280 正常值范圍在 1.8-2.1 之間。如果實驗所測得的比值大于 2.1，則 RNA 在提取過程中收到了一定的降解；如果實驗所測得的比值小于 1.8，則表明輪蟲的RNA提取過程受到了蛋白質或者DNA的污染。在電泳圖中，若28sRNA與 18sRNA 條帶的亮度比為 2:1（如圖 3.1），則可認為所提取的萼花臂尾輪蟲的RNA 純度較高，即沒有被降解。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]水產動物雷帕霉素受體信號通路的研究進展[J]. 辛芳,王雷,劉梅,王寶杰,蔣克勇,孫國瓊. 海洋科學. 2016(01)
[2]mTOR信號通路與代謝性疾病[J]. 袁大陸. 當代體育科技. 2015(06)
[3]單巢類輪蟲有性生殖的研究進展與展望[J]. 孫棟,牛翠娟. 湖泊科學. 2013(02)
[4]mTOR信號通路的生物學功能[J]. 陳洪菊,屈藝,母得志. 生命的化學. 2010(04)
[5]納米多孔SiO2薄膜的制備與紅外光譜研究[J]. 王娟,張長瑞,馮堅,楊大祥. 光譜學與光譜分析. 2005(07)
[6]環(huán)境因子對萼花臂尾輪蟲種群動態(tài)的影響[J]. 席貽龍,黃祥飛,汪本勤,許蘊嫻. 安徽師范大學學報(自然科學版). 2000(04)
[7]溫度對壺狀臂尾輪蟲實驗種群動態(tài)的影響[J]. 席貽龍,黃祥飛. 海洋與湖沼. 2000(01)
[8]淡水輪蟲繁殖生物學研究進展[J]. 楊家新,黃祥飛,劉建康. 水產學報. 1999(03)
[9]密度和溫度對萼花臂尾輪蟲產卵量和混交雌體的影響[J]. 楊家新,黃祥飛. 湖泊科學. 1996(04)
[10]溫度對萼花臂尾輪蟲卵的發(fā)育、種群增長和生產量的影響[J]. 黃祥飛. 水生生物學報. 1985(03)
本文編號：3018618
【文章來源】：南京師范大學江蘇省 211工程院校
【文章頁數(shù)】：70 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
單巣綱輪蟲的生活史Fig1.1Thelifehistorymodelofmonogonontarotifers
圖 1.2 mTOR 蛋白組成結構注釋：從左到右依次是，N 端有 12-20 個氨基酸組成介導蛋白互作的 HEAT repeat dom結構域、FAT 結構域（focal adhesion targeting domain）、FRB 結構域（FKBP12-rapambinding domain）和 C 末端的激酶結構域、FATC 結構域（focal adhesion targeting domaC-terminal domain）Figure 1.1 The structure of mTOR proteinPs: from left to right, HEAT repeat domain, focal adhesion targeting domain, FBP12-rapambinding, which is composed by 12-20 amino acids, domain and C-terminal kinase domain afocal adhesion targeting domain of C-terminal domain對酵母的研究表明，TOR 蛋白在生物體內發(fā)揮著兩種基本功能; 一種是細胞生長，另一種是調節(jié)細胞生長的位置[38]。當生長條件有利時，TOR 蛋較活躍，酵母細胞維持核糖體的生物發(fā)生、翻譯起始和營養(yǎng)導入的速率大。而，用雷帕霉素處理的快速生長的酵母細胞，由于缺乏氮或缺乏 TOR1 和 T都會顯著下調一般蛋白質的合成，上調巨噬細胞的自噬作用，并激活血清應應轉錄因子。因此，當生長條件允許時，雷帕霉素敏感的 TOR 信號傳導會
第 3 章 溫度對萼花臂尾輪蟲 TOR，S6K 和 S6 與 HSP70 基因表達量的影響提取輪蟲的總 RNA 之后，我們需要對提取的輪蟲 RNA 質量進行檢測。將新提取的全部 RNA 用 DEPC 水稀釋 50-100，然后用分光光度儀測定其在 260nm和 280nm 處的吸光值，因為 RNA 易降解的特性，所以整個過程都需要在冰上進行。OD260/OD280 正常值范圍在 1.8-2.1 之間。如果實驗所測得的比值大于 2.1，則 RNA 在提取過程中收到了一定的降解；如果實驗所測得的比值小于 1.8，則表明輪蟲的RNA提取過程受到了蛋白質或者DNA的污染。在電泳圖中，若28sRNA與 18sRNA 條帶的亮度比為 2:1（如圖 3.1），則可認為所提取的萼花臂尾輪蟲的RNA 純度較高，即沒有被降解。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]水產動物雷帕霉素受體信號通路的研究進展[J]. 辛芳,王雷,劉梅,王寶杰,蔣克勇,孫國瓊. 海洋科學. 2016(01)
[2]mTOR信號通路與代謝性疾病[J]. 袁大陸. 當代體育科技. 2015(06)
[3]單巢類輪蟲有性生殖的研究進展與展望[J]. 孫棟,牛翠娟. 湖泊科學. 2013(02)
[4]mTOR信號通路的生物學功能[J]. 陳洪菊,屈藝,母得志. 生命的化學. 2010(04)
[5]納米多孔SiO2薄膜的制備與紅外光譜研究[J]. 王娟,張長瑞,馮堅,楊大祥. 光譜學與光譜分析. 2005(07)
[6]環(huán)境因子對萼花臂尾輪蟲種群動態(tài)的影響[J]. 席貽龍,黃祥飛,汪本勤,許蘊嫻. 安徽師范大學學報(自然科學版). 2000(04)
[7]溫度對壺狀臂尾輪蟲實驗種群動態(tài)的影響[J]. 席貽龍,黃祥飛. 海洋與湖沼. 2000(01)
[8]淡水輪蟲繁殖生物學研究進展[J]. 楊家新,黃祥飛,劉建康. 水產學報. 1999(03)
[9]密度和溫度對萼花臂尾輪蟲產卵量和混交雌體的影響[J]. 楊家新,黃祥飛. 湖泊科學. 1996(04)
[10]溫度對萼花臂尾輪蟲卵的發(fā)育、種群增長和生產量的影響[J]. 黃祥飛. 水生生物學報. 1985(03)
本文編號：3018618
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