目的:山竹子素（Garcinol,Garc）來(lái)源于熱帶植物藤黃科藤黃屬植物山竹的果殼中,也稱之為山竹醇、藤黃素。目前研究表明Garc具有抗肝癌的功能,但其抗腫瘤是否與調(diào)控生物節(jié)律相關(guān)尚不明確。本研究選取HepG2和huh7肝癌細(xì)胞株為研究對(duì)象,以生物信息學(xué)分析數(shù)據(jù)為導(dǎo)向,在探究Garc具有抑制肝癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲,誘導(dǎo)凋亡的效應(yīng)的基礎(chǔ)上,探討生物節(jié)律基因的紊亂與腫瘤的增殖及遷移的密切關(guān)系,以期證實(shí)人體生物節(jié)律基因可作為藥物抗肝癌的藥理學(xué)靶點(diǎn),為肝癌的臨床治療提出新的方向。方法:1.采用CCK-8法,克隆形成實(shí)驗(yàn),Edu增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Garc對(duì)肝癌細(xì)胞的增殖水平的調(diào)控,用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell小室遷移,侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)肝癌細(xì)胞遷移,侵襲能力,Huvec血管生成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)血管生成能力,檢測(cè)線粒體膜電位實(shí)驗(yàn)檢測(cè)肝癌細(xì)胞線粒體膜電位的變化,蛋白免疫印跡法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白cleaved-PARP1（Y34）及cleaved-PARP1（E51）蛋白的表達(dá)水平。2.通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印跡法,細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)及RT-PCR,探討山竹子素對(duì)生物節(jié)律基因Bmal1和Per2表達(dá)產(chǎn)物蛋白及mRNA的變化... 

【文章來(lái)源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：92 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮寫索引
第一章 緒論
    1.1 原發(fā)性肝癌
    1.2 山竹子素（Garc）
        1.2.1 Garc來(lái)源及理化性質(zhì)
        1.2.2 Garc抗腫瘤的分子機(jī)制及其信號(hào)通路
        1.2.3 Garc與肝癌
        1.2.4 小結(jié)
    1.3 生物節(jié)律基因
        1.3.1 生物節(jié)律基因概述
        1.3.2 生物節(jié)律基因功能及種類
        1.3.3 生物節(jié)律基因與肝癌的發(fā)生發(fā)展
        1.3.4 生物節(jié)律基因與肝癌的預(yù)后
    1.4 研究設(shè)計(jì)思路
        1.4.1 研究背景
        1.4.2 研究目的及意義
        1.4.3 研究方案
第二章Garc對(duì)肝癌增殖及凋亡的調(diào)控
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
        2.1.2 主要儀器與設(shè)備
        2.1.3 常用試劑配制
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)藥品
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 Hep G2 和Huh7 肝癌細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2.2 CCK-8 法與克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)肝癌細(xì)胞增殖活力
        2.2.3 Edu增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖率
        2.2.4 線粒體膜電位檢測(cè)肝癌細(xì)胞線粒體膜電位變化
        2.2.5 蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)增殖及凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)
        2.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 Garc對(duì)肝癌細(xì)胞增殖活力的影響
        2.3.2 Garc對(duì)肝癌細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)及凋亡蛋白cleaved-PARP1（Y34）及cleaved-PARP1（E51）的表達(dá)水平的影響
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章Garc對(duì)肝癌遷移、侵襲及血管生成的調(diào)控
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)常用儀器及設(shè)備
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑配制
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)所需藥品
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
        3.2.2 Transwell小室遷移及侵襲實(shí)驗(yàn)
        3.2.3 Huvec血管生成實(shí)驗(yàn)
        3.2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 Garc對(duì)肝癌細(xì)胞遷移,侵襲能力的影響
        3.3.2 Garc對(duì)Huvec血管形成能力的影響
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章Garc對(duì)生物節(jié)律基因Bmal1 和Per2 的表達(dá)的調(diào)控
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象
        4.1.2 材料與試劑
        4.1.3 主要儀器與設(shè)備
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)Garc對(duì)生物節(jié)律基因蛋白水平表達(dá)的影響
        4.2.2 細(xì)胞免疫熒光評(píng)價(jià)Garc對(duì)生物節(jié)律基因蛋白在細(xì)胞中的定位
        4.2.3 RT-PCR評(píng)價(jià)Garc對(duì)生物節(jié)律基因蛋白m RNA表達(dá)的影響
        4.2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1.蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)Garc對(duì)生物節(jié)律基因蛋白表達(dá)的影響
        4.3.2. RT-PCR檢測(cè)Garc對(duì)生物節(jié)律基因m RNA水平表達(dá)的影響
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第五章 外源性調(diào)節(jié)生物節(jié)律基因Bmal1 和Per2 對(duì)Garc抑制肝癌細(xì)胞增殖及遷移作用中的影響
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備
        5.1.3 實(shí)驗(yàn)藥品及試劑
    5.2 試驗(yàn)方法
        5.2.1 慢病毒轉(zhuǎn)染預(yù)實(shí)驗(yàn)
        5.2.2 慢病毒正式感染
        5.2.3 Per2 過(guò)表達(dá)慢病毒和Bmal1 過(guò)表達(dá)慢病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染肝癌Huh7 和Hep G2細(xì)胞株轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)
        5.2.4 Per2 敲低慢病毒和Bmal1 敲低慢病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染肝癌Huh7 和Hep G2 細(xì)胞株轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)
        5.2.5 生物節(jié)律基因Bmal1 和Per2 過(guò)表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞增殖活力及遷移能力的影響
        5.2.6 生物節(jié)律基因Bmal1 和Per2 的敲低對(duì)肝癌細(xì)胞增殖活力及遷移能力的影響
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 Per2過(guò)表達(dá)慢病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染肝癌 HepG2和huh7細(xì)胞株轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)
        5.3.2 生物節(jié)律基因Bmal1 和Per2 過(guò)表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞增殖活力及遷移能力的影響
        5.3.3 生物節(jié)律基因Bmal1 和Per2 的敲低對(duì)肝癌細(xì)胞增殖活力及遷移能力的影響
    5.4 討論
    5.5 小結(jié)
第六章 人生物節(jié)律基因Bmal1, Per2 的蛋白生物信息學(xué)分析
    6.1 材料與儀器
        6.1.1 材料與試劑
    6.2 試驗(yàn)方法
        6.2.1 Genecards網(wǎng)站對(duì)人Bmal1 和Per2 蛋白的亞細(xì)胞定位分析
        6.2.2 SOPMA網(wǎng)站和布魯克海文蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)（PDB）對(duì)人Bmal1 和Per2 蛋白空間結(jié)構(gòu)分析
        6.2.3 String蛋白質(zhì)相互作用預(yù)測(cè)網(wǎng)站對(duì)人Bmal1 和Per2 蛋白質(zhì)預(yù)測(cè)
    6.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        6.3.1 人Bmal1 和Per2 蛋白的亞細(xì)胞定位分析
        6.3.2 人Per2, Bmal1 蛋白空間結(jié)構(gòu)分析
        6.3.3 人Bmal1, Per2 相互作用蛋白質(zhì)預(yù)測(cè)及分析
    6.4 討論
    6.5 小結(jié)
第七章 結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及參加的學(xué)術(shù)會(huì)議



本文編號(hào)：3014044