目的檢測重組腺病毒介導(dǎo)的p53基因（Ad-p53）對舌癌細胞株SCC-15的轉(zhuǎn)染率及增殖抑制作用,分析Ad-p53誘導(dǎo)SCC-15凋亡的作用機制。方法通過構(gòu)建帶有示蹤基因-紅色熒光蛋白基因（DsRed）的Adp53,熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡下觀察Ad-p53對舌癌細胞株SCC-15的轉(zhuǎn)染情況及增殖抑制作用,應(yīng)用流式細胞儀檢測藥物轉(zhuǎn)染率及誘導(dǎo)凋亡率;Western blotting、RT-PCR、Q-PCR檢測p53及其上下游基因MDM2、P21基因以及凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax蛋白和mRNA的表達變化,探討Ad-p53誘導(dǎo)SCC-15凋亡的作用機制。結(jié)果隨著Ad-p53-DsRed感染復(fù)數(shù)（MOI）的增加,轉(zhuǎn)染率、細胞凋亡率逐漸增加。Western blot和RT-PCR/QPCR檢測到Ad-p53-DsRed作用后P53、P21、促凋亡基因Bax的mRNA和蛋白表達增加,而抗凋亡基因Bcl-2的mRNA和蛋白表達降低。結(jié)論 Ad-p53能有效轉(zhuǎn)染并誘導(dǎo)舌癌細胞株SCC-15細胞凋亡。 

【文章來源】：北京口腔醫(yī)學. 2020,28(05)

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

重組腺病毒載體圖譜A:Ad-Ds Red;B:Adp53-Ds Red

不同MOI藥物對SCC-15的轉(zhuǎn)染率及誘導(dǎo)凋亡率流式散點圖和線性比較圖

圖3 不同MOI藥物對SCC-15的轉(zhuǎn)染率及誘導(dǎo)凋亡率流式散點圖和線性比較圖Mdm2是p53的負調(diào)控因子，通過轉(zhuǎn)錄抑制和行使E3功能降解P53,同時mdm2又是p53的轉(zhuǎn)錄靶基因，含有一個p53基因結(jié)合位點，可在野生型p53基因的誘導(dǎo)下轉(zhuǎn)錄增強，導(dǎo)致細胞中Mdm2蛋白水平升高。p53-Mdm2的負反饋調(diào)節(jié)環(huán)既可調(diào)節(jié)P53蛋白活性又可調(diào)節(jié)Mdm2基因的表達[22]。本研究中實驗組細胞內(nèi)p53m RNA以及蛋白表達隨著加入的Ad-p53滴度的增加逐漸增強，而Mdm2 m RNA和蛋白的表達水平分別與p53m RNA以及蛋白表達水平呈現(xiàn)相同的增加趨勢。表明進入細胞內(nèi)的野生型P53基因激活了Mdm2基因的轉(zhuǎn)錄，從而增高其表達水平。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3012331