歐李（Cerasus humilis（Bge.）Sok.）為薔薇科（Rosaceae）櫻桃屬（Ceraras）經濟林木,是中國特有的多年生物種。歐李原產于偏遠的北部山區(qū),荒野和其他一些人口稀少的地區(qū),對干旱,寒冷和貧瘠環(huán)境具有很高的抵抗力。雖然歐李抗旱性極強,但目前對其應對脅迫的遺傳和分子機制知之甚少。NAC（NAM,ATAF1/2,CUC2）轉錄因子家族是植物特異性轉錄因子超家族并且存在于廣泛多樣的植物中,在植物生長、發(fā)育和應激反應中均發(fā)揮調控作用。該轉錄因子在擬南芥、水稻等模式植物中的研究已經趨于成熟,然而在林木中的研究僅僅集中在調節(jié)木材形成、單萜及花青素合成等方面,調控非生物脅迫的研究有待加強。為了進一步豐富林木NAC轉錄因子的基因資源,我們以“農大四號”歐李為試驗材料,克隆NAC轉錄因子基因ChNAC1并進行表征,探究其在干旱脅迫響應中的功能。主要的研究工作及結果如下:1、利用RT-PCR技術從歐李葉片系中克隆了歐李ChNAC1基因,該cDNA全長894bp,編碼含有297個氨基酸的蛋白,存在典型的NAM保守結構域,分子量約為34.21kDa,等電點為8.09,為不穩(wěn)定、親水性... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１歐李總ＲＮＡ電泳檢測??－

２．４試驗結果與分析??２．４．１?ＯＷＶ＾ＩＣ７基因的獲取??提取歐李葉片總ＲＮＡ后進行瓊脂糖凝膠電泳檢測并測試其濃度，電泳結果如圖２－１??所示，２８ｓＲＮＡ、１８ｓＲＮＡ清晰可見，５ｓＲＮＡ條帶較弱，條帶無降解。ＯＤ２６０／２８０在??１．８－２．０之間，濃度在２００－３００之間，表明ＲＮＡ的純度良好，可應用于后續(xù)相關試驗。??——＾?２８ＳＲＮＡ??＂?１８ｓＲＮＡ??；ｌ；：；?＂?５ｓＲＮＡ??圖２－１歐李總ＲＮＡ電泳檢測??Ｆｉｇ．?２－１?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｃ．?ｈｕｍｉｌｉｓ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ??以ＲＮＡ反轉錄獲取的ｃＤＮＡ為模板，利用高保真酶進行ＰＣＲ擴增，得到一條特異??性條帶，大小與預期一致（圖２－２Ａ）。膠回收純化后的ＤＮＡ條帶清晰明亮（圖２－??２Ｂ）。經測序比對發(fā)現(xiàn)該片段是歐李０？Ｍ４Ｃ／基因（圖２－３），可用于后續(xù)載體的構建??過程。??Ａ??Ｂ??９?？８９４ｂｐ??３?？８９４ｂｐ?Ｉ??ＨＵ??圖２－２Ｃ７？Ａ＾Ｃ７基因ＰＣＲ擴增（Ａ）與純化（Ｂ）??Ｆｉｇ．?２－２?ＰＣＲ?ａｍｐ

２．４．２?ＣＡＡ＾Ｃｉ基因生物信息學分析??２．４．２．１?０福０的序列分析??從歐李中克隆的Ｃ７？Ａ＾Ｃ７ＣＤＳ序列如圖２－４所示，全長８９４ｂｐ，編碼含有２９７個氨??基酸的蛋白。該蛋白在氨基酸２５－３９６之間存在典型的ＮＡＭ保守結構域（圖２－５）。??１?ＡＴＧＴＣＧＴＣＣＴＣＣＧＡＴｎＡＣＡＧＣＴＧＣＣＧＣＣＣＧＧＣＴＴＣＡＧＧｍＣＡＴＣＣＧＡＣＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧ??１?｜?＾?３?ｉ?Ｑ?Ｌ?Ｐ?Ｐ?Ｇ?Ｆ?Ｒ?Ｆ?Ｈ?Ｆ?Ｔ?Ｄ?Ｈ??６１?ＣＴＣＧＴＣＡＡＧＣＡＣＴＡＣＣＴＣＴＧＯＣＧＣＡＡＡＴＧＣＣＡＧＴＣＧＣＡＧＣＣＧＡＴＴＴＣＧＯＴＯＣＣＧＡＴＡＡＴＣ??２ｉ?Ｉ

【參考文獻】：
期刊論文
[1]基于TXRF法的歐李果肉中營養(yǎng)元素特征分析[J]. 李衛(wèi)東,李歐,和銀霞,葉麗琴,王越,張忠爽,陳玉婷,金基石.  食品科學. 2015(04)
[2]植物NAC轉錄因子家族研究概況[J]. 彭輝,于興旺,成慧穎,張樺,石慶華,李建貴,麻浩.  植物學報. 2010(02)
[3]內蒙古歐李果肉和果仁中營養(yǎng)成分分析[J]. 張美莉,鄧秋才,楊海霞,張子儀.  氨基酸和生物資源. 2007(04)
[4]歐李的研究進展[J]. 湯志洪,蔡琳.  安徽農學通報. 2007(15)
[5]干旱脅迫對光果脹果甘草種子萌發(fā)及可溶性蛋白質含量的影響[J]. 梁新華,張明哲,高金霞.  寧夏農林科技. 2004(04)
[6]紅鈣果栽培技術與應用前景[J]. 劉十通.  中國生態(tài)農業(yè)學報. 2003(01)
[7]歐李系列產品的研制[J]. 杜俊杰,杜俊民,池建偉.  山西農業(yè)大學學報. 1999(01)

博士論文
[1]黃瓜NAC轉錄因子CsATAF1響應干旱脅迫的機制研究[D]. 王晉芳.中國農業(yè)大學 2018

碩士論文
[1]歐李生物學特性和性狀相關性的研究[D]. 錢誠.河北工程大學 2013
[2]鹽和干旱脅迫下歐李的生理響應及轉錄組分析[D]. 孫孟超.東北林業(yè)大學 2013



本文編號：3008073