FLORICAULA/LEAFY（FLO/LFY）同源基因時花發(fā)育的調(diào)節(jié)因子,處于花發(fā)育調(diào)控網(wǎng)絡的中心節(jié)點。目前,大部分的LFY基因的研究都集中在開花植物中,但是LFY基因并不是開花植物所特有的,在不開的植物如苔蘚中也存在。本研究以濕地蘚（Hyophila javanica Brid.）為研究材料,通過PCR、RT-PCR、RACE結(jié)合Tail-PCR的技術(shù),獲得濕地蘚LFY同源基因的cDNA序列、基因組DNA序列及啟動子序列。通過生物信息學分析,對濕地蘚LFY基因的結(jié)構(gòu),蛋白質(zhì)的性質(zhì)進行分析。并構(gòu)建了LFY同源基因的系統(tǒng)進化樹,對LFY同源基因進行進化分析。本研究開展了濕地蘚LFY基因的原核表達分析,并對原核表達的條件進行優(yōu)化,為后續(xù)蛋白質(zhì)的純化奠定基礎(chǔ)。此外本研究還對濕地蘚LFY基因的表達進行了實時熒光定量分析。本研究可以為揭示LFY基因在苔蘚植物中的功能研究提供有價值的參考。本研究的主要結(jié)果如下:（1）利用RT-PCR結(jié)合RACE技術(shù)克隆了濕地蘚LFY基因的完整基因片段,該基因全長為2633 bp,包括4個外顯子與3個內(nèi)含子,其cDNA全長為1402 bp和1219 bp（HjL... 

【文章來源】：西南林業(yè)大學云南省

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

苔蘚植物生活史Fig.1Lifecycleofamoss

西南林業(yè)大學碩士學位論文30軟件，進行多序列比對分析，找到相對保守的核苷酸序列區(qū)段（見圖），設計熒光定量Actin基因的簡并引物，分別為F-50:TCNATCATGAARTGYGAYGTNG，R-50:ATCCACATCTGYTGGAAVGT。圖2-239條Actin基因序列的比對分析圖Fig.2-2Analignmentcomparisonof39kindsofspeciesplantDNAsequencehomologousodActingenens以濕地蘚的cDNA為模板，結(jié)合簡并引物F-50和R-50，進行濕地蘚Actin基因的PCR擴增。反應體系如下：cDNA2.0μl3A-F(10μM/each)1.0μl3A-R(10μM/each)1.0μl2×TaqPCRMasterMix20.0μlddH2O16.0μlTotalVol.40.0μl

西南林業(yè)大學碩士學位論文34圖3-2濕地蘚LFY基因中間片段PCR擴增結(jié)果Fig.3-2PCRamplificationresultofLFYfromHyophilajavanicamiddlefragment注：1表示LFY基因中間片段PCR擴增結(jié)果；M表示DL500DNAmarker；Note:1isthePCRproductionofofLFYfromHyophilajavanicamiddlefragment;MistheDL500DNAmarker將上述獲得的濕地蘚LFY基因中間片段序列輸入NCBI中BLAST選項中的NucleotideBLAST進行序列相似性分析（圖3-3），結(jié)果顯示該序列與已克隆的LFY基因片段相似性很高，其相似度在76%以上，且與Genbank報道的LFY/FLO同源基因均具有較高的同源性，證明所獲片段為LFY/FLO同源片段，由此確定該片段為濕地蘚LFY基因的部分編碼序列。圖3-3濕地蘚LFY基因中間片段序列相似性分析Fig.3-3nucleotideBLASTalignmentgraphicofLFYfromHyophilajavanicamiddlefragmentinNCBI

【參考文獻】：
期刊論文
[1]茶樹LEAFY基因的克隆和表達分析[J]. 韓興杰,徐玲玲,廖亮,李同建,鄧輝勝,樊啟水.  園藝學報. 2015(08)
[2]白樺開花調(diào)控相關(guān)基因FLC、LFY和SOC1的克隆及表達分析[J]. 王子佳,姜靜,劉桂豐,劉菲菲,李慧玉.  西南林業(yè)大學學報. 2014(04)
[3]菲油果LEAFY基因的表達模式及啟動子克隆[J]. 馮延芝,張琳,袁德義,龍洪旭,劉敏,張日清,陳圣林.  植物遺傳資源學報. 2014(04)
[4]慈竹LEAFY基因和啟動子的克隆及序列分析[J]. 白瓊,孫曉嬌,于麗霞,鄢波.  竹子研究匯刊. 2014(02)
[5]利用LEAFY基因探討擬單性木蘭屬植物的多倍體起源及進化（英文）[J]. 王震,段焰青,李青青.  Agricultural Science & Technology. 2013(05)
[6]新疆早實核桃LFY同源基因的克隆與分析[J]. 葉春秀,牛建新.  西北農(nóng)業(yè)學報. 2012(11)
[7]棉花GhFTL1基因啟動子的克隆及序列分析[J]. 張定國,黃先忠,東銳,鄭銀英,崔百明.  石河子大學學報(自然科學版). 2012(05)
[8]草莓LFY同源基因的克隆及其表達分析[J]. 劉月學,鄒冬梅,李賀,張志宏,馬躍,代紅艷.  園藝學報. 2012(05)
[9]毛白楊PtLFY基因啟動子的克隆及其瞬時表達分析[J]. 李昊,陳仲,李英,王佳,安新民.  中國生物工程雜志. 2012(04)
[10]抗癌蛋白NOR1基因工程重組蛋白表達條件的優(yōu)化和純化[J]. 向波,王理,王衛(wèi),李文娟,易梅,李小玲,曾朝陽,李桂源.  中南大學學報(醫(yī)學版). 2011(07)

碩士論文
[1]草莓pgip基因的克隆及其序列分析[D]. 張杰.四川農(nóng)業(yè)大學 2008



本文編號：3003878