芥子油苷是十字花目植物中由氨基酸衍生來的特殊的代謝產物。在擬南芥（Arabidopsis thaliana）中,起源于色氨酸的吲哚族芥子油苷是植物防御多種病原菌和食草動物所必需的,研究表明這些化合物具有很強的抗菌活性和潛在的信號功能。擬南芥作為模式植物,其芥子油苷的生物合成和降解已經研究得非常清晰了。西蘭花（Brassica oleracea var.italica）是十字花科的常見蔬菜,不僅含有全面的營養(yǎng)成分和礦物質,還含有大量的芥子油苷,但關于其芥子油苷的代謝途徑基因的研究卻很少。因此對于西蘭花中芥子油苷的相關研究具有重要意義。CYP83B1是擬南芥吲哚族芥子油苷生物代謝途徑中的重要合成酶,可催化中間產物吲哚-3-乙醛肟（IAOx）生成1-酸式硝基-2-吲哚基-乙烷（1-aci-nitro-2-indolyl-ethane）,并進一步合成吲哚族芥子油苷。IAOx不僅是吲哚族芥子油苷合成的中間產物,同時也是合成植物激素生長素的前體。CYP83B1的敲除可導致IAOx的累積,并產生明顯的生長素過量如頂端優(yōu)勢的表型。因此CYP83B1不僅能參與吲哚族芥子油苷的生物合成還會影響植物的生長發(fā)... 

【文章來源】：東北農業(yè)大學黑龍江省 211工程院校

【文章頁數】：75 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 芥子油苷概述
    1.2 吲哚族芥子油苷的研究進展
        1.2.1 吲哚族芥子油苷生物合成研究進展
        1.2.2 吲哚族芥子油苷生物降解研究進展
        1.2.3 吲哚族芥子油苷的調控
    1.3 吲哚族芥子油苷及其降解產物的生物學功能
        1.3.1 防御作用
        1.3.2 抗癌作用
        1.3.3 參與植物激素生長素的合成
        1.3.4 參與植物抗毒素的合成
    1.4 西蘭花中芥子油苷研究進展
    1.5 CYP83B1的研究進展
    1.6 本研究的目的意義
    1.7 本研究的研究內容與技術路線
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株與質粒
        2.1.3 生化試劑
        2.1.4 培養(yǎng)基
        2.1.5 實驗儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 BoCYP83B1序列信息獲得
        2.2.2 BoCYP83B1的克隆及生物信息學分析
        2.2.3 35 S::BoCYP83B1植物表達載體的構建
        2.2.4農桿菌介導的擬南芥遺傳轉化35S::BoCYP83B1
        2.2.5 35 S::BoCYP83B1轉基因擬南芥的分子生物學檢測
        2.2.6 35 S::BoCYP83B1轉基因擬南芥表型分析
        2.2.7 BoCYP83B1的表達模式分析
        2.2.8 BoCYP83B1基因對激素及逆境脅迫的響應
3 結果與分析
    3.1 BoCYP83B1的克隆
        3.1.1 BoCYP83B1CDS的克隆
        3.1.2 BoCYP83B1mRNA全長的擴增
        3.1.3 BoCYP83B1的生物信息學分析
        3.1.4 BoCYP83B1蛋白的多重比對
        3.1.5 BoCYP83B1蛋白的進化分析
    3.2 35 S::BoCYP83B1植物表達載體的構建
    3.3 35 S::BoCYP83B1轉基因擬南芥的構建
    3.4 35 S::BoCYP83B1轉基因擬南芥的分子生物學檢測
        3.4.1 35 S::BoCYP83B1轉基因擬南芥DNA水平鑒定
        3.4.2 35 S::BoCYP83B1轉基因擬南芥RNA水平鑒定
    3.5 35 S::BoCYP83B1轉基因擬南芥表型分析
        3.5.1 35 S::BoCYP83B1轉基因擬南芥形態(tài)學表型觀察
        3.5.2 35 S::BoCYP83B1轉基因擬南芥芥子油苷的檢測
        3.5.3 35 S::BoCYP83B1轉基因擬南芥芥子油苷代謝途徑關鍵基因分析
        3.5.4 35 S::BoCYP83B1轉基因擬南芥生長素含量測定
    3.6 BoCYP83B1的組織定位
        3.6.1 BoCYP83B1啟動子的克隆
        3.6.2 BoCYP83B1啟動子元件分析
BoCYP83B1::GUS植物表達載體的構建">        3.6.3 P_BoCYP83B1::GUS植物表達載體的構建
BoCYP83B1::GUS轉基因擬南芥的構建">        3.6.4 P_BoCYP83B1::GUS轉基因擬南芥的構建
BoCYP83B1::GUS轉基因擬南芥的篩選">        3.6.5 P_BoCYP83B1::GUS轉基因擬南芥的篩選
BoCYP83B1::GUS轉基因擬南芥的分子生物學檢測">        3.6.6 P_BoCYP83B1::GUS轉基因擬南芥的分子生物學檢測
        3.6.7 BoCYP83B1的表達模式分析
    3.7 BoCYP83B1的對激素及逆境脅迫的響應
BoCYP83B1::GUS轉基因擬南芥中的GUS對激素及逆境脅迫響應">        3.7.1 P_BoCYP83B1::GUS轉基因擬南芥中的GUS對激素及逆境脅迫響應
        3.7.2 西蘭花中BoCYP83B1對激素及逆境脅迫的響應
4 討論
    4.1 BoCYP83B1功能的探討
    4.2 BoCYP83B1逆境表達模式的探討
5 結論
致謝
參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]西蘭花營養(yǎng)價值及深加工研究進展[J]. 吳廣輝,畢韜韜.  農產品加工. 2015(21)
[2]西蘭花預防和治療腫瘤研究的新進展[J]. 洪姣,王佳蕊,黃春琦,徐殿琴,張婷,許健.  腫瘤藥學. 2014(06)
[3]西蘭花中蘿卜硫素提取、分離與抗癌活性研究[J]. 季宇彬,池文杰,鄒翔,王志舉.  哈爾濱商業(yè)大學學報(自然科學版). 2005(03)
[4]植物細胞色素P450[J]. 余小林,曹家樹,崔輝梅,葉紈芝.  細胞生物學雜志. 2004(06)



本文編號：3003389