目的:觀察柿葉提取物（PLE）對(duì)阿爾茨海默病細(xì)胞模型HEK293-APPswe（20E2）的抗氧化應(yīng)激的影響,并從核因子E2相關(guān)因子2（Nrf2）/血紅素加氧酶1（HO-1）信號(hào)通路研究其作用機(jī)制。方法:Western blot檢測(cè)APP蛋白表達(dá)水平,ELISA檢測(cè)各組細(xì)胞上清Aβ_1-40的量,確定細(xì)胞模型是否建立成功。用CCK-8檢測(cè)不同濃度的柿葉提取物對(duì)細(xì)胞活性的影響,選定干預(yù)最佳濃度。設(shè)分組:SH-SY5Y為空白對(duì)照組（NC組）,20E2為模型組（20E2組）,用柿葉提取物干預(yù)為加藥組（20E2+PLE組）。DCFH-DA熒光探針檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)ROS的變化,ELISA檢測(cè)各組細(xì)胞上清Aβ_1-42的量,Western blot檢測(cè)胞核、胞漿Nrf2和全細(xì)胞HO-1蛋白的表達(dá)水平變化。結(jié)果:與模型組相比,加藥組ROS表達(dá)減少,細(xì)胞外Aβ_1-42濃度降低,細(xì)胞核內(nèi)Nrf2表達(dá)增多,HO-1蛋白含量增加。結(jié)論:柿葉提取物能有效降低模型組氧化應(yīng)激的水平,可能是通過降低Aβ_1-42的聚集,激活Nrf2/H... 

【文章來源】：中國免疫學(xué)雜志. 2017,33(06)北大核心

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Westernblot與ELISA法檢測(cè)APP、Aβ1-40蛋白表達(dá)Fig．1ExpressionofAPP，Aβ1-40detectedbyWesternblot

Aβ1-40的量明顯增加，NC組(47.28±5.36)pg/ml，20E2組細(xì)胞Aβ1-40含量(2105.84±70.69)pg/ml，兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01，圖1)。表明20E2符合阿爾茨海默病病理細(xì)胞模型。2.2CCK-8檢測(cè)不同濃度的PLE對(duì)細(xì)胞活性的影響結(jié)果顯示PLE在3～6μg/ml可增加細(xì)胞活性(P＜0.05)，超過6μg/ml后有抑制細(xì)胞活性的作用，為了減少藥物毒性作用，最終選用有效濃度圖1Westernblot與ELISA法檢測(cè)APP、Aβ1-40蛋白表達(dá)Fig．1ExpressionofAPP，Aβ1-40detectedbyWesternblotandELISANote:*.P＜0.01vsNCgroup.圖2不同濃度的PLE對(duì)細(xì)胞活性的影響Fig．2CellviabilityindifferentconcentrationsofPLEwasassayedbyCCK-8methodNote:*.P＜0.05vsNCgroup;#.P＜0.05vs20E2group.范圍內(nèi)的低濃度的3μg/ml為干預(yù)濃度。2.3PLE對(duì)20E2細(xì)胞內(nèi)ＲOS變化的影響采用DCFH-DA熒光探針檢測(cè)各組細(xì)胞ＲOS的表達(dá)，與NC組相比，20E2細(xì)胞內(nèi)ＲOS熒光信號(hào)明顯增強(qiáng)，氧化損傷明顯，PLE干預(yù)后，ＲOS熒光信號(hào)減弱(圖3)。2.4PLE對(duì)細(xì)胞外Aβ1-42濃度的影響用ELISA檢測(cè)相同數(shù)量級(jí)的各組細(xì)胞處理24h后細(xì)胞外Aβ1-42濃度，與NC組相比，模型組細(xì)胞外Aβ1-42明顯增多，PLE干預(yù)后，加藥組較模型組細(xì)胞外Aβ1-42明顯減少(圖4)。2.5Westernblot檢測(cè)Nrf2，HO-1蛋白表達(dá)分別檢測(cè)胞漿Nrf2和胞核Nrf2，用PLE干預(yù)后，加藥組較模型組胞核Nrf2表達(dá)增加，全細(xì)胞蛋白HO-1表達(dá)增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖5)。圖3PLE對(duì)20E2內(nèi)ＲOS變化的影響(×100)Fig．3EffectofPLEtoＲOSinHEK293-APPswe(×100)Note:A.NCgroup;B.20E2group;C.20E2+PLEgroup.*.P＜0.05vsNCgroup.圖4PLE對(duì)細(xì)胞外Aβ1-42濃度的影響Fig．4EffectofPLEtoextracellularlevelofAβ1-

檢測(cè)各組細(xì)胞ＲOS的表達(dá)，與NC組相比，20E2細(xì)胞內(nèi)ＲOS熒光信號(hào)明顯增強(qiáng)，氧化損傷明顯，PLE干預(yù)后，ＲOS熒光信號(hào)減弱(圖3)。2.4PLE對(duì)細(xì)胞外Aβ1-42濃度的影響用ELISA檢測(cè)相同數(shù)量級(jí)的各組細(xì)胞處理24h后細(xì)胞外Aβ1-42濃度，與NC組相比，模型組細(xì)胞外Aβ1-42明顯增多，PLE干預(yù)后，加藥組較模型組細(xì)胞外Aβ1-42明顯減少(圖4)。2.5Westernblot檢測(cè)Nrf2，HO-1蛋白表達(dá)分別檢測(cè)胞漿Nrf2和胞核Nrf2，用PLE干預(yù)后，加藥組較模型組胞核Nrf2表達(dá)增加，全細(xì)胞蛋白HO-1表達(dá)增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖5)。圖3PLE對(duì)20E2內(nèi)ＲOS變化的影響(×100)Fig．3EffectofPLEtoＲOSinHEK293-APPswe(×100)Note:A.NCgroup;B.20E2group;C.20E2+PLEgroup.*.P＜0.05vsNCgroup.圖4PLE對(duì)細(xì)胞外Aβ1-42濃度的影響Fig．4EffectofPLEtoextracellularlevelofAβ1-42Note:A.NCgroup;B.20E2group;C.20E2+PLEgroup;*.P＜0.05vsNCgroup.·856·中國免疫學(xué)雜志2017年第33卷


本文編號(hào)：3001931