哺乳動(dòng)物受精后,合子基因組轉(zhuǎn)錄處于沉默狀態(tài),胚胎著床前發(fā)育主要受控于母源物質(zhì)。隨著卵母細(xì)胞中母源物質(zhì)降解,新形成的胚胎基因組將發(fā)生大規(guī)模轉(zhuǎn)錄,這一事件被稱為合子基因組激活（Zygotic genome activation,ZGA）。作為母源-合子轉(zhuǎn)換的關(guān)鍵環(huán)節(jié),ZGA是受精后發(fā)生的重要生物學(xué)事件。對(duì)胚胎的正常發(fā)育至關(guān)重要。深入了解ZGA事件,將有助于克服胚胎體外發(fā)育阻滯問(wèn)題,從而為輔助生殖技術(shù)在臨床實(shí)際應(yīng)用掃除障礙。為研究Dux基因在小鼠早期胚胎發(fā)育,特別是在ZGA過(guò)程中的作用。首先利用RT-qPCR和免疫熒光技術(shù)檢測(cè)Dux和Zscan4、MERVL、Eif1a等ZGA相關(guān)基因在早期胚胎發(fā)育各個(gè)時(shí)期的表達(dá)情況,結(jié)果表明Dux的mRNA在早期胚胎發(fā)育各時(shí)期均可被檢測(cè)到,但在2-細(xì)胞時(shí)期表達(dá)量最高;與mRNA表達(dá)不同的是,Dux編碼的蛋白僅能在2-細(xì)胞和4-細(xì)胞時(shí)期被檢測(cè)到;作為ZGA事件的標(biāo)志基因Zscan4、MERVL、Gm6763和Eif1a均呈現(xiàn)出在2-細(xì)胞特異性高表達(dá),與Dux的表達(dá)模式相一致。為進(jìn)一步研究Dux的作用,我們通過(guò)顯微注射siRNA直接干擾Dux在受精卵中的表達(dá),... 

【文章來(lái)源】：內(nèi)蒙古大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū) 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述 母源-合子轉(zhuǎn)換過(guò)程中表觀遺傳的動(dòng)態(tài)變化
    1 表觀遺傳變化
    2 與MZT相關(guān)的調(diào)控因子
第二章 實(shí)驗(yàn)研究 Dux基因在小鼠合子基因組激活過(guò)程中的作用研究
    前言
    1 材料
        1.1 儀器和設(shè)備
        1.2 耗材和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.2.1 耗材
            1.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.3 試劑及配制
            1.3.1 分子實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑
            1.3.2 免疫熒光相關(guān)試劑
            1.3.3 試劑配制
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
            2.1.1 Dux在小鼠植入前胚胎發(fā)育中的動(dòng)態(tài)變化
            2.1.2 Dux對(duì)胚胎發(fā)育的影響
            2.1.3 驗(yàn)證Dux與 Zscan4 的作用關(guān)系
            2.1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
            2.1.5 Dux過(guò)表達(dá)小鼠的構(gòu)建
        2.2 操作方法
            2.2.1 超數(shù)排卵
            2.2.2 受精卵和MII期卵母細(xì)胞的收集
            2.2.3 胚胎的體外培養(yǎng)
            2.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR操作
            2.2.5 胚胎免疫熒光染色
            2.2.6 胚胎的免疫印跡分析
            2.2.8 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.2.9 雙熒光素酶報(bào)告基因活性檢測(cè)
            2.2.10 Dux過(guò)表達(dá)小鼠的鑒定
    3 結(jié)果
        3.1 Dux在植入前胚胎發(fā)育中的動(dòng)態(tài)變化
            3.1.1 Dux在植入前胚胎發(fā)育中的表達(dá)模式
            3.1.2 ZGA相關(guān)基因在MII卵母細(xì)胞和植入前胚胎發(fā)育中的表達(dá)模式
        3.2 Dux對(duì)胚胎發(fā)育的影響
            3.2.1 Dux敲減效率檢測(cè)
            3.2.2 Dux敲減后的胚胎發(fā)育情況
            3.2.3 Dux敲減后ZGA相關(guān)基因表達(dá)的影響
        3.3 驗(yàn)證Dux與 Zscan4 的作用關(guān)系
            3.3.1 LTR與 Zscan4 上游理論啟動(dòng)子區(qū)域序列比對(duì)的結(jié)果
            3.3.2 Dux表達(dá)載體構(gòu)建
            3.3.3 螢火蟲(chóng)熒光素酶的構(gòu)建
            3.3.4 雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果
        3.4 Dux過(guò)表達(dá)小鼠的鑒定
    4 討論
    5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3000561