紫花苜蓿（Medicago sativa L.）具有適應(yīng)性強(qiáng)、蛋白含量高、適口性好和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高等特點(diǎn),是全球栽培面積最大的優(yōu)良牧草。由于我國(guó)草產(chǎn)業(yè)發(fā)展相對(duì)滯后,紫花苜蓿產(chǎn)量和種子嚴(yán)重不足,盡管進(jìn)口量逐年增加,仍難滿足市場(chǎng)需求。此外紫花苜�？购的望}能力較弱,在干旱和鹽漬化環(huán)境下難以生長(zhǎng),加之蟲害的威脅,這嚴(yán)重制約了紫花栽培面積的擴(kuò)大和產(chǎn)量的進(jìn)一步提高。因此,利用分子育種手段培育兼具抗旱、耐鹽和抗蟲性狀的紫花苜蓿新品種（系）,對(duì)促進(jìn)我國(guó)草牧業(yè)發(fā)展具有重要意義。本研究主要分為兩大部分:一是構(gòu)建抗蟲基因Bt的植物表達(dá)載體pCAMBIA3301-Bt cry1ac,分別轉(zhuǎn)化擬南芥和紫花苜蓿;二是將共表達(dá)PeDREB2a和KcERF基因的中苜一號(hào)紫花苜蓿株系（Z6和Z7）和野生型（WT）植株定植到大田,進(jìn)行株高、分枝數(shù)等表型分析,同時(shí)進(jìn)行乙烯、吲哚乙酸和纖維素含量的測(cè)定和轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析。取得的主要研究結(jié)果如下:1.優(yōu)化了中苜一號(hào)和甘農(nóng)四號(hào)兩個(gè)紫花苜蓿品種遺傳轉(zhuǎn)化體系:確定葉片為最佳外植體;MS培養(yǎng)基+0.2 mg/L 6-BA+4 mg/L 2,4-D為愈傷組織誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基;2 mg/L為草銨... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

pCAMBIA3301農(nóng)桿菌菌液PCR鑒定

圖 3-2 PPT 濃度為 0 和 5 mg/L 對(duì)愈傷誘導(dǎo)的影響igure 3-2 Effects of 0 and 5 mg/L PPT on callus induc度對(duì)葉片愈傷誘導(dǎo)的影響。愈傷組織受 PPT 15 d 逐漸顯現(xiàn)，愈傷組織誘導(dǎo)率的結(jié)果為：15傷組織的誘導(dǎo)受到了一定的影響，培養(yǎng) 15 d 并最終死亡，最終誘導(dǎo)率為 66 %；濃度為 2 現(xiàn)象就相較明顯，且愈傷誘導(dǎo)率顯著下降 33 有褐化現(xiàn)象的外植體誘導(dǎo)率僅為 18 %；濃度為傷組織出現(xiàn)褐化現(xiàn)象，15 d 時(shí)幾乎所有的外經(jīng)死亡。因此選擇 2 mg/L PPT 作為篩選濃度。表 3-11 不同 PPT 濃度對(duì)愈傷誘導(dǎo)的影響s of different concentrations of glufosinate-ammonium o度愈傷組織誘導(dǎo)率(%)

碩士學(xué)位論文 紫花苜蓿轉(zhuǎn) Bt基因材料的創(chuàng)制及轉(zhuǎn)PeDREB2a 和KcERF 基因材料其進(jìn)行 Bar 基因 PCR 鑒定。結(jié)果表明，有 15 株轉(zhuǎn)基因中苜一號(hào)號(hào)擴(kuò)增出特異性目的片段，其中 Bar 基因條帶為 552 bp(圖 3-3)，帶，可初步說明含有 Bar 基因的植物表達(dá)載體 pCAMBIA3301 已經(jīng)料中苜一號(hào)和甘農(nóng)四號(hào)中。轉(zhuǎn)化率分別為 48%和 46%。


本文編號(hào)：3000118