目的構(gòu)建小鼠resistin基因表達載體,并將其導入小鼠巨噬細胞系RAW264.7細胞中,從而建立能夠高表達resistin的單核巨噬細胞系。方法從小鼠脂肪組織提取mRNA,PCR后連接到真核表達載體進行測序驗證,同時構(gòu)建慢病毒載體,感染至RAW264.7細胞中,通過熒光顯微鏡觀察是否轉(zhuǎn)染成功,ELISA方法檢測蛋白分泌水平。結(jié)果雙酶切結(jié)果顯示構(gòu)建的質(zhì)粒中有大小為345bp的resistin插入條帶;經(jīng)過測序及BLAST比對,插入序列與Genebank中resistin的小鼠CDS序列相同,沒有移碼突變;熒光顯微鏡觀察病毒感染后的RAW264.7細胞,紅色熒光比率達到70%;ELISA檢測培養(yǎng)的感染細胞上清中resistin分泌顯著增加。結(jié)論成功獲得了能夠分泌resistin蛋白的單核/巨噬細胞。 

【文章來源】：解剖科學進展. 2020,26(05)

【文章頁數(shù)】：4 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 動物及細胞
    1.2 主要試劑
    1.3 引物設計
    1.4 目的基因resistin的擴增
    1.5 重組質(zhì)粒的構(gòu)建和檢驗
    1.6 電轉(zhuǎn)
    1.7 病毒重組質(zhì)粒的構(gòu)建和檢驗
    1.8 病毒感染
    1.9 Raw264.7細胞培養(yǎng)上清中Resistin蛋白水平檢測
    1.1 0 統(tǒng)計分析
2 結(jié)果
    2.1 重組質(zhì)粒的檢驗
    2.2 重組質(zhì)粒測序鑒定及電轉(zhuǎn)
    2.3 病毒感染效率檢測
    2.4 細胞外分泌resistin的檢測
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]RNA結(jié)合蛋白MOV10在阿爾茨海默病人腦組織及細胞中的表達及意義[J]. 馬珺,薛一雪,鞏威,朱璐,高麗麗,商秀麗.  解剖科學進展. 2017(06)



本文編號：2995724