桿狀病毒作為一種具有高效表達能力的分子生物學工具,在昆蟲細胞及蟲體中用于重組蛋白質(zhì)的生產(chǎn)已有超過三十年的歷史,并且相關技術仍然在持續(xù)改進。此外,桿狀病毒還可作為基因呈遞載體,用于將外源基因呈遞至哺乳動物細胞及體內(nèi)。由于哺乳動物體內(nèi)沒有任何病毒復制或其他潛在風險,桿狀病毒作為基因呈遞載體也越來越受到重視。本文利用實驗室構(gòu)建的禽類干擾素桿狀病毒生產(chǎn)平臺,成功表達了高活性雞α（chIFN-α）、γ（chIFN-γ）以及λ（chIFN-λ3）干擾素,并使用雞成纖維細胞（CEF）對各類雞干擾素在抗禽類疾病,如新城疫（ND）的實際應用效果進行了驗證,發(fā)現(xiàn)在各類干擾素組合中chIFN-γ抗NDV的效果最好。通過利用轉(zhuǎn)錄組測序技術對試驗樣品的分析發(fā)現(xiàn),干擾素處理后細胞中多種干擾素誘導基因（ISGs）及參與抗原呈遞的各類基因都呈顯著上調(diào)表達,同時細胞自身也開始分泌chIFN-γ,這為chIFN-γ抗NDV的良好效果提供了分子水平的解釋,也為chIFN-γ作為新型抗病毒藥物及疫苗佐劑的應用提供了理論依據(jù)。同時根據(jù)預實驗及相關文獻報道,進一步應用家蠶桿狀病毒表達平臺所獲得的chIFN-α及chIFN-γ對Ⅰ... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學院北京市

【文章頁數(shù)】：133 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

三類干擾素的信號通路示意圖

我們?nèi)?6孔板試驗中的最適干擾素濃度,利用細胞培養(yǎng)瓶對chIFN-γ的抗NDV活性進行了擴大重復試驗,分別從NDV組,chIFN-γ+NDV組每12 h收集培養(yǎng)基上清,并利用q PCR對NDV的拷貝數(shù)進行檢測。結(jié)果如圖2-1所示:我們發(fā)現(xiàn),在感染后24 h及36 h,病毒對照組及干擾素抑制組細胞培養(yǎng)基上清液中的病毒拷貝數(shù)差異達到了顯著水平,證明chINF-γ對NDV的復制有很好的抑制作用。

為了探尋chINF-γ在抗NDV過程中所起的作用,我們將chINF-γ組(ChINF-γ),NDV感染組(NDV),ch INF-γ+NDV感染組(chIFN-γ_NDV),空白對照組(Control)的細胞在感染后20h全部收集,提取RNA進行了轉(zhuǎn)錄組測序。總計獲得了超過70G的數(shù)據(jù)量,各組生物學重復之間相關性非常高(R2>0.97),質(zhì)控及相關性分析結(jié)果如表2-2及圖2-2所示:2.2.3 在干擾素抗NDV試驗中不同組組別之間的差異表達基因

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Suppression of gastric cancer growth by baculovirus vector-mediated transfer of normal epithelial cell specific-1 gene[J]. Wei Huang, Sheng-Ping Hu, Biao Li, Department of Nuclear Medicine, Ruijin Hospital, Shanghai Jiaotong University School of Medicine, Shanghai 200025, China Wei Huang, Xiang-Long Tian, Yun-Lin Wu, Jie Zhong, Li- Fen Yu, Department of Gastroenterology, Ruijin Hospital, Shanghai Jiaotong University School of Medicine, Shanghai 200025, China.  World Journal of Gastroenterology. 2008(38)

碩士論文
[1]雞干擾素α和γ在家蠶中的表達及其抗病毒活性檢測[D]. 李皓洋.中國農(nóng)業(yè)科學院 2015



本文編號：2995491