桿狀病毒作為一種具有高效表達(dá)能力的分子生物學(xué)工具,在昆蟲細(xì)胞及蟲體中用于重組蛋白質(zhì)的生產(chǎn)已有超過(guò)三十年的歷史,并且相關(guān)技術(shù)仍然在持續(xù)改進(jìn)。此外,桿狀病毒還可作為基因呈遞載體,用于將外源基因呈遞至哺乳動(dòng)物細(xì)胞及體內(nèi)。由于哺乳動(dòng)物體內(nèi)沒(méi)有任何病毒復(fù)制或其他潛在風(fēng)險(xiǎn),桿狀病毒作為基因呈遞載體也越來(lái)越受到重視。本文利用實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的禽類干擾素桿狀病毒生產(chǎn)平臺(tái),成功表達(dá)了高活性雞α（chIFN-α）、γ（chIFN-γ）以及λ（chIFN-λ3）干擾素,并使用雞成纖維細(xì)胞（CEF）對(duì)各類雞干擾素在抗禽類疾病,如新城疫（ND）的實(shí)際應(yīng)用效果進(jìn)行了驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)在各類干擾素組合中chIFN-γ抗NDV的效果最好。通過(guò)利用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)對(duì)試驗(yàn)樣品的分析發(fā)現(xiàn),干擾素處理后細(xì)胞中多種干擾素誘導(dǎo)基因（ISGs）及參與抗原呈遞的各類基因都呈顯著上調(diào)表達(dá),同時(shí)細(xì)胞自身也開始分泌chIFN-γ,這為chIFN-γ抗NDV的良好效果提供了分子水平的解釋,也為chIFN-γ作為新型抗病毒藥物及疫苗佐劑的應(yīng)用提供了理論依據(jù)。同時(shí)根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)及相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道,進(jìn)一步應(yīng)用家蠶桿狀病毒表達(dá)平臺(tái)所獲得的chIFN-α及chIFN-γ對(duì)Ⅰ... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：133 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

三類干擾素的信號(hào)通路示意圖

我們?nèi)?6孔板試驗(yàn)中的最適干擾素濃度,利用細(xì)胞培養(yǎng)瓶對(duì)chIFN-γ的抗NDV活性進(jìn)行了擴(kuò)大重復(fù)試驗(yàn),分別從NDV組,chIFN-γ+NDV組每12 h收集培養(yǎng)基上清,并利用q PCR對(duì)NDV的拷貝數(shù)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果如圖2-1所示:我們發(fā)現(xiàn),在感染后24 h及36 h,病毒對(duì)照組及干擾素抑制組細(xì)胞培養(yǎng)基上清液中的病毒拷貝數(shù)差異達(dá)到了顯著水平,證明chINF-γ對(duì)NDV的復(fù)制有很好的抑制作用。

為了探尋chINF-γ在抗NDV過(guò)程中所起的作用,我們將chINF-γ組(ChINF-γ),NDV感染組(NDV),ch INF-γ+NDV感染組(chIFN-γ_NDV),空白對(duì)照組(Control)的細(xì)胞在感染后20h全部收集,提取RNA進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組測(cè)序。總計(jì)獲得了超過(guò)70G的數(shù)據(jù)量,各組生物學(xué)重復(fù)之間相關(guān)性非常高(R2>0.97),質(zhì)控及相關(guān)性分析結(jié)果如表2-2及圖2-2所示:2.2.3 在干擾素抗NDV試驗(yàn)中不同組組別之間的差異表達(dá)基因

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Suppression of gastric cancer growth by baculovirus vector-mediated transfer of normal epithelial cell specific-1 gene[J]. Wei Huang, Sheng-Ping Hu, Biao Li, Department of Nuclear Medicine, Ruijin Hospital, Shanghai Jiaotong University School of Medicine, Shanghai 200025, China Wei Huang, Xiang-Long Tian, Yun-Lin Wu, Jie Zhong, Li- Fen Yu, Department of Gastroenterology, Ruijin Hospital, Shanghai Jiaotong University School of Medicine, Shanghai 200025, China.  World Journal of Gastroenterology. 2008(38)

碩士論文
[1]雞干擾素α和γ在家蠶中的表達(dá)及其抗病毒活性檢測(cè)[D]. 李皓洋.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2015



本文編號(hào)：2995491