目的:設(shè)計(jì)、構(gòu)建并包裝靶向c-myc基因的CRISPR/Cas9腺病毒;評估靶向c-myc基因的CRISPR/Cas9腺病毒系統(tǒng)對肝癌的抑制作用.方法:采用生物信息學(xué)網(wǎng)站設(shè)計(jì)靶向c-myc基因的gRNA,以GFP作為對照設(shè)計(jì)GFP gRNA;通過T7E1篩選出編輯效率高的gRNA并將篩選的gRNA構(gòu)建CRISPR/Cas9腺病毒載體并包裝腺病毒,通過分析細(xì)胞增殖、周期和凋亡及遷移能力的變化來評估靶向c-myc基因的CRISPR/Cas9腺病毒系統(tǒng)對肝癌的抑制作用.結(jié)果:成功設(shè)計(jì)、構(gòu)建并包裝靶向c-myc基因的CRISPR/Cas9腺病毒;靶向c-myc基因的CRISPR/Cas9腺病毒系統(tǒng)能夠顯著抑制Hepa1-6細(xì)胞的增殖和遷移、阻滯細(xì)胞周期進(jìn)程,但對細(xì)胞凋亡無影響.結(jié)論:靶向c-myc基因的CRISPR/Cas9腺病毒系統(tǒng)可在細(xì)胞水平明顯抑制肝癌細(xì)胞的生長. 

【文章來源】：暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版). 2016,37(04)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        （1）細(xì)胞培養(yǎng)
        （2）小鼠c-myc gRNA序列設(shè)計(jì)
        （3）篩選編輯效率高的gRNA
        （4）c-myc gRNA CRISPR/Cas9腺病毒載體的構(gòu)建、病毒的包裝和鑒定
        （5）敲除c-myc基因?qū)epa1-6細(xì)胞增殖、周期、凋亡及遷移的影響
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 T7E1檢測c-myc gRNA的編輯效率
    2.2 腺病毒載體的構(gòu)建
    2.3 檢測c-myc腺病毒對Hepa1-6細(xì)胞的影響
3 討論



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