茶樹（Camellia sinensis（L.）O.Kuntze）是我國重要的木本經(jīng)濟(jì)作物,由于其茶葉和茶花中富含的天然藥用成分對(duì)人類具有多種保健功效和營養(yǎng)價(jià)值,因此,目前對(duì)茶樹經(jīng)濟(jì)效益的開發(fā)主要集中在茶葉和茶花營養(yǎng)成分的提取、分離純化和深加工等方面。其中,茶樹花芽從分化到果實(shí)成熟會(huì)持續(xù)一年之久,這種全年漫長(zhǎng)的生殖生長(zhǎng)勢(shì)必會(huì)與茶樹芽葉的營養(yǎng)生長(zhǎng)爭(zhēng)奪有機(jī)物和養(yǎng)分,而開花是茶樹由營養(yǎng)生長(zhǎng)階段向生殖生長(zhǎng)階段的過渡,因此,有必要解析茶樹成花轉(zhuǎn)變的分子機(jī)制,合理的控制開花時(shí)間,從而獲得高產(chǎn)高質(zhì)的茶葉和優(yōu)質(zhì)的茶花,為茶產(chǎn)業(yè)的完善和發(fā)展提供理論支持。在植物成花誘導(dǎo)的調(diào)控途徑中,CO 和SVP（SHORT VEGETATIVE PHASE）基因分別在光周期途徑和溫度途徑中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。其中,CO基因作為光信號(hào)通路中的橋梁基因,控制著光信號(hào)向成花信號(hào)的轉(zhuǎn)變。而SVP基因作為典型的MADS-box轉(zhuǎn)錄因子參與溫度調(diào)控路徑,通過激活或抑制下游成花基因的表達(dá)而調(diào)控開花。為了闡明茶樹CaCOL4和CsSVP基因在植物成花轉(zhuǎn)變中的功能。本研究以陜西茶樹代表性品種“紫陽櫧葉種”（Camellia sines... 

【文章來源】：陜西師范大學(xué)陜西省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２技術(shù)路線圖??Ｆｉｇ．?１－２?Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ?ｒｏａｄｍａｐ??

第２章茶樹Ｃ＾ＣＯＵ基因克隆??次之，５ｓ?ｒＲＮＡ條帶最弱，且２８ｓ的亮度約為１８ｓ的兩倍，表明提取的總ＲＮＡ質(zhì)??量較好，基本無降解。綜上，所提取的茶樹莖和幼葉總ＲＮＡ能夠滿足后續(xù)基因克??隆等實(shí)驗(yàn)的要求。??ｉ８ｓ?－＞??５ｓ?－＞??圖２－１茶樹莖和幼葉總ＲＮＡ??Ｍ：?ＤＬ２０００Ｍａｋｅｒ；?１：莖總?ＲＮＡ；?２：幼葉總?ＲＮＡ??Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｈｅ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｆｒｏｍ?ｓｔｅｍｓ?ａｎｄ?ｙｏｕｎｇ?ｌｅａｖｅｓ?ｏｆ?Ｃ?ｓｉｎｅｎｓｉｓ??Ｍ：?ＤＬ２０００?Ｍａｋｅｒ；?１：?Ｔｈｅ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｆｒｏｍ?ｓｔｅｍｓ；?２：?Ｔｈｅ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｆｒｏｍ?ｙｏｕｎｇ?ｌｅａｖｅｓ??２．３．２?ＣｓＣＯＫ基因同源序列的克隆??根據(jù)ＮＣＢＩ上已提交的茶樹近緣物種０７Ｌ４同源基因氨基酸序列的比對(duì)結(jié)果，??在葡萄ＦｖＣＷｉＵ基因的保守區(qū)段設(shè)計(jì)正反向特異引物，以茶樹莖或幼葉ｃＤＮＡ第??一鏈為模板進(jìn)行同源片段擴(kuò)增，ＰＣＲ產(chǎn)物經(jīng)電泳檢測(cè)發(fā)現(xiàn)擴(kuò)增出長(zhǎng)度約為７５０?ｂｐ??的目的條帶，見圖２－２，與預(yù)期同源片段長(zhǎng)度基本一致，因此，回收純化該擴(kuò)增片??段并進(jìn)一步亞克隆測(cè)序。測(cè)序結(jié)果顯示該片段序列長(zhǎng)度為７３２?ｂｐ，見圖２－３。經(jīng)??ＮＣＢＩ數(shù)據(jù)庫中的ＢＬＡＳＴ同源比對(duì)分析，見圖２－４，顯示該序列與葡葡，番輿，煙??草等多個(gè)物種屮的問源基因相似，相似度高達(dá)７０％左右。因此，初步預(yù)測(cè)??克隆得到的是茶樹基因的保守片段，初步命名為ＣｓＣＯ＂。??２５??

ｉｚｉｎｈｕ？?ｉｔｉＫｉｂａ?ｚｉｎｃ?ｆｏｘｉｅｒ?ｏｒｏｉｅｉｎ?ＣＯＮＳＴＡＭＳ－ｌＩＫＥ?４?（ＬｖＯＣｌＱ７４ｌ９＜Ｍｒｉ?ｒｒｓＲｈｊＡ?３５７?３５７?８９％?１ｅ－９３?６８．４５％?Ｘｆｅｌ?ＱＨ￥０２８７ｆｉ３＾??－－ＰＨＥＤｉＣＴＥＤ－?ＴｈｅｏＣｆｏｍａ?ｃａｃａｏ２＞ｎｃ?（ｉｎｏｅｒ?ｐｒｏｉｅｉｎ?ＣＯＮＳＷｊＳ?ＵＫ￡?＜?ａ．ＣＸ；１Ｂ５８；６ｆｆｉ）．?ｒｒ．ＲＷ?３５２?３５２?８７％?Ａｅ－９２?６８．２８％?ａｄＪ？ｌＳ．＾ｇ｝？４．１??圖２－４茶樹ＣｓＣＯＷ同源片段的比對(duì)結(jié)果??Ｆｉｇ．?２－４?Ｔｈｅ?ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ＣｓＣＯＬ４?ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ?ｆｒａｇｍｅｎｔ?ｆｒｏｍ?Ｃ．?ｓｉｎｅｎｓｉｓ．??２．３．３?ＣｓＣＯＬ４基因３，末端的克隆??根據(jù)２．３．２克隆得到的茶樹ＣｓＣＯＩ＊／基因的同源片段，利用３＇ＲＡＣＥ正向特異??引物ＧＳＰ進(jìn)行兩輪ＰＣＲ擴(kuò)增，第二輪巢式ＰＣＲ產(chǎn)物經(jīng)電泳檢測(cè)發(fā)現(xiàn)擴(kuò)增出長(zhǎng)度??約為６００?ｂｐ的目的條帶，見圖２－５，回收純化該目的條帶并進(jìn)一步亞克隆測(cè)序。測(cè)??序結(jié)果顯示該片段序列長(zhǎng)度為５９８?ｂｐ，見圖２－６，包括正反向引物３＇－ＧＳＰ２、ＮＵＰ??以及ＣｓＣＯ以基因同源片段的部分序列和Ｐｌｏｙ?（Ａ）尾。因此，初步預(yù)測(cè)克隆得到??的是茶樹Ｃ．ｙＣ＇（）Ｚ＾／基因的３＇末端。??７００ｂｐ?—＞?Ｉ??＾￣?約?６００ｂｐ??５００ｂｐ?—＾?■??圖２－５茶樹ＣｓＣＯＬＷ末端的克隆??Ｆｉｇ．?２－５?Ｔｈｅ?ｃｌｏｎｉｎｇ?ｏｆ?ＣｓＣＯＬ４?３＇?ｅｎｄ?ｆｒｏｍ?Ｃ．?Ｓｉｎｅｎｓｉｓ．??Ｍ：?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]中國水仙中NSVP2基因可促進(jìn)煙草開花[J]. 夏鵬云,楊雪,沈馨,張偉,吳文婷,李小方.  上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)科學(xué)版). 2016(03)
[2]JOINTLESS/MACROCALYX/SLMBP21多基因轉(zhuǎn)化番茄植株表型鑒定與分析[J]. 劉旦梅,張彥潔,裴雁曦.  中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2016(05)
[3]茶樹LEAFY基因的克隆和表達(dá)分析[J]. 韓興杰,徐玲玲,廖亮,李同建,鄧輝勝,樊啟水.  園藝學(xué)報(bào). 2015(08)
[4]茶葉內(nèi)含成分與人體健康[J]. 程啟坤.  世界農(nóng)業(yè). 2015(05)
[5]過量表達(dá)柳樹兩個(gè)SVP1s基因提高擬南芥抗鹽脅迫能力[J]. 余春梅,李敏,何新雨,李玉娟,王瑩,談峰,張健.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2015(04)
[6]茶樹花芽分化解剖與形態(tài)學(xué)研究[J]. 施雁飛,游新才,張逸,呂天航,張今今.  陜西師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2015(02)
[7]茶葉生物化學(xué)研究進(jìn)展[J]. 宛曉春,李大祥,張正竹,夏濤,凌鐵軍,陳琪.  茶葉科學(xué). 2015(01)
[8]中國水仙中SVP類似基因NSVP2可促進(jìn)擬南芥的花序分枝[J]. 李小方,李瑞,張雪平,楊雪,邱艷,張偉,孫越,王洋.  植物生理學(xué)報(bào). 2014(12)
[9]擬南芥開花時(shí)間調(diào)控的分子基礎(chǔ)[J]. 張藝能,周玉萍,陳瓊?cè)A,黃小玲,田長(zhǎng)恩.  植物學(xué)報(bào). 2014(04)
[10]植物SVP基因的研究進(jìn)展[J]. 劉世男,林新春.  生物技術(shù)通報(bào). 2014(06)

博士論文
[1]雷竹SVP-like、SOC1-like基因的克隆及功能分析[D]. 劉世男.北京林業(yè)大學(xué) 2016
[2]COL7及FOF1參與調(diào)控?cái)M南芥發(fā)育的生化分析[D]. 王宏歸.湖南大學(xué) 2013

碩士論文
[1]茶樹MADS-box家族B類基因CsTM6的克隆及其與CsDEF的功能研究[D]. 唐紅.陜西師范大學(xué) 2016
[2]茶樹CsDEF基因克隆及AP3/DEF基因系統(tǒng)進(jìn)化分析[D]. 秋夢(mèng)穎.陜西師范大學(xué) 2015
[3]茶樹MADS-box家族B類基因CsGLO1和CsGLO2的克隆及其與C類基因CsAG的功能研究[D]. 周坤.陜西師范大學(xué) 2015
[4]茶樹CsAP1基因克隆及AP1基因系統(tǒng)進(jìn)化分析[D]. 施雁飛.陜西師范大學(xué) 2014
[5]茶樹CSAG基因克隆及AG基因系統(tǒng)進(jìn)化分析[D]. 程國山.陜西師范大學(xué) 2014
[6]短日照不敏感型菊花開花時(shí)間基因CONSTANS-like的克隆與表達(dá)分析[D]. 陳陽.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[7]小麥CONSTANS-like基因的克隆與分析[D]. 蘇亞中.河南大學(xué) 2012
[8]棉花CONSTANS-like基因的克隆及表達(dá)分析[D]. 代軍杰.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2012
[9]二穗短柄草中VRT2-like基因的克隆及初步的功能分析[D]. 李文艷.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[10]茶樹花精油提取及其抗氧化和抑菌作用的研究[D]. 金玉霞.浙江大學(xué) 2010



本文編號(hào)：2994474