I型干擾素（Type Ⅰ interferons）是關(guān)鍵的抗病毒細(xì)胞因子,在脊椎動物物種形成過程中不斷進(jìn)化以應(yīng)對各種各樣的病毒威脅。α干擾素（Interferon-α,IFN-α）是由機體白細(xì)胞對抗病毒、細(xì)菌或其他外來入侵者產(chǎn)生的,具有抗病毒增殖、抗腫瘤生長和免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)功能的糖蛋白。目前,有關(guān)動物干擾素的研究發(fā)展迅速,市場已有雞、犬、豬等商用重組干擾素產(chǎn)品面市。然而,國內(nèi)外有關(guān)于華北豹（Panthera pardus fontanierii）干擾素方面的報道寥寥無幾。華北豹是我國特有的豹亞種,又稱中國豹（Chinese Leopard）。由于棲息地的破壞、人類的殺戮和病毒性疾病的傳播,華北豹的數(shù)量呈現(xiàn)急劇下降的趨勢,已被列入世界自然保護(hù)聯(lián)盟瀕危物種紅色名錄。干擾素的廣譜抗病毒作用很可能成為防治華北豹病毒病的新途徑和新方法,也符合當(dāng)前自然生態(tài)、無污染、無殘留、綠色環(huán)保的標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)GenBank發(fā)表的金錢豹IFN-α基因序列,我們設(shè)計并合成了一對特異性引物。以華北豹的核酸DNA為模板,首次擴增得到11個華北豹IFN-α家族的亞型基因（PfIFN-α/α1/α2/α3/4/α5/α... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１典型和非典型的Ｉ型干擾素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑（摘自Ｃｈｅｎｅｔａｌ．，２０１７ｔＳ３］；Ｐｌａｔａｎｉａｓ，２００５［ｒｅ］）??Ｆｉｇ．?１－１?Ｔｙｐｉｃａｌ?ａｎｄ?ａｔｙｐｉｃａｌ?ｔｙｐｅ?Ｉ?ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ?ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｔｈｗａｙｓ??１．４?ｉ型干擾素的生?

?東北林業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文???３結(jié)果??３．１華北豹ＩＦＮ－ａ亞型基因擴增??３．１．１華北豹ＩＦＮ－ａ全基因克隆??以提取的華北豹基因組ＤＮＡ為模板，ｆｌＦＮ－ａＳ和ｆｌＦＮ－ａＡ為上下游引物進(jìn)行華北??豹ＩＦＮ－ａ全基因擴增。擴增結(jié)果經(jīng)１％瓊脂糖凝膠電泳分析，在５００－７５０?ｂｐ之間獲得一??條特異性條帶，與預(yù)期目的片段（６７７?ｂｐ）大小相符，如圖３－１所示。??２０Ｑ０ｂｐ??５〇〇ｂｐＦ＾ＷＢＢ｜：：?Ｉ??，ＭｂＵ??Ｍ：?ＤＮＡ分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，１：陰性對照；２：華北豹ＩＦＮ－ａ全基因擴增??圖３－１?ＰＣＲ擴增結(jié)果??Ｆｉｇ．?３－１?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ??３．１．２華北豹ＩＦＮ－ａ亞型成熟肽基因的擴增??將擴增得到的華北豹ＩＦＮ－ａ全基因進(jìn)行純化回收，連接到克隆載體ｐＭＤ？１９－Ｔ載??體上，構(gòu)建重組質(zhì)粒ｐＭＤＴＭ１９－ｆ�。疲危�。取大量重組質(zhì)粒ｐＭＤ？ｌ９－ｆＩＦＮ－ａ先經(jīng)價ｍＨ?Ｉ??單酶切鑒定，再經(jīng)及／ｗＨ?Ｉ和／／／ａｍＭＩＩ雙酶切鑒定。將單雙酶切鑒定都正確的陽性重組??質(zhì)粒ｐＭＤ？１９－ｆ�。疲危崴椭撂K州泓迅生物公司進(jìn)行測序。測序結(jié)果中取氨基酸序列不同??的各個菌株作為不同的亞型，分別命名為?ｐＭＤＴＭ１９－ｆＩＦＮ－??ａ／ａ?１?／?ａ２／ａ３?／ａ４／ａ５?／?ａ６／ａ７／ａ８／ａ９／ａｌ０〇??以?ｐＭＤＴＭ１９－ｆｌＦＮ－ａ／ａｌ／ａ２／ａ３／ａ４／ａ５／ａ６／ａ７／ａ８／ａ９／ａｌ０?為模板，ＰｆｌＦＮ－ａＳ?和?ＰｆＩＦＮ－ａＡ??為上下游引物進(jìn)行華北豹ＩＦＮ－ａ亞型成熟肽基因的擴增。擴增結(jié)果如圖３－２所示，在約?

圖３－］７兔抗ＰｆｌＦＮ－ａ多克隆抗體效價??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬α干擾素的研究進(jìn)展[J]. 榮柳,沈國順.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2015(17)
[2]Ⅰ型干擾素的抗病毒機制研究進(jìn)展[J]. 史青竹,趙智,石新慧,韓根成.  軍事醫(yī)學(xué). 2015(07)
[3]干擾素對腫瘤的抑制作用[J]. 熊輝,付麗萍,周琳.  華中科技大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2014(05)
[4]金錢豹肝炎的病例報告[J]. 張美蓮.  中國畜牧獸醫(yī)文摘. 2014(05)
[5]華北豹:只生活在中國[J]. 宋大昭,李繼生.  森林與人類. 2012(08)
[6]動物干擾素的研究進(jìn)展[J]. 王照,王磊,李天松,王勝樂,王鐵鋒,高玉偉,黃耕,王鐵成,楊松濤,王化磊,夏咸柱.  中國動物檢疫. 2012(02)
[7]干擾素（Ⅰ型α、β,Ⅱ型γ）的分子結(jié)構(gòu)和生物活性的對應(yīng)關(guān)系及其臨床應(yīng)用[J]. 李柳萍,楊胥微,王妍.  微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展. 2011(02)
[8]Effects of odors on behaviors of captive Amur leopards Panthera pardus orientalis[J]. Carin HARRINGTON.  Current Zoology. 2009(01)
[9]干擾素的研究進(jìn)展及其在動物臨床中的應(yīng)用[J]. 楊東亮,林永利.  福建畜牧獸醫(yī). 2009(01)
[10]干擾素-γ對人肺腺癌SPC-A-1細(xì)胞增殖和B7分子表達(dá)的影響[J]. 王儀麟,林勇,孫思慶.  中國實用內(nèi)科雜志. 2008(S2)

博士論文
[1]干擾素刺激基因15對豬瘟病毒復(fù)制的影響及機制[D]. 李程.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2019
[2]牛Ⅰ型干擾素家族新成員（IFN-ε、IFN-κ、IFN-χ）抗病毒信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與表達(dá)調(diào)控研究[D]. 郭永麗.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[3]重組牛IFN-λ3的制備及其與IFN-α/IFN-β/IFN-γ抗病毒活性比較研究[D]. 張潤祥.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[4]天府肉鵝α干擾素基因克隆、表達(dá)及其生物學(xué)活性研究[D]. 劉菲.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[5]家豬I型干擾素多基因家族的結(jié)構(gòu)和特性及干擾素-alpha對口蹄疫基因工程疫苗的免疫增強作用[D]. 程功.復(fù)旦大學(xué) 2008

碩士論文
[1]三種牛干擾素融合蛋白的制備及其生物學(xué)活性鑒定[D]. 程薪同.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[2]干擾素刺激基因USP18、OAS2在干擾素治療慢乙肝效果預(yù)測中的臨床意義研究[D]. 劉洋.廈門大學(xué) 2018
[3]犬干擾素α4、α2基因的表達(dá)及抗病毒活性分析[D]. 王晶宇.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[4]家兔γ干擾素原核表達(dá)、抗病毒活性以及單克隆抗體的研究[D]. 彭偉.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[5]牛IFN-α1、IFN-α7、IFN-α14的酵母表達(dá)及其理化性質(zhì)與生物學(xué)活性研究[D]. 邵建偉.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[6]雞和鵪鶉β-干擾素基因的克隆、表達(dá)及免疫調(diào)節(jié)作用的研究[D]. 鄭蓓.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[7]犬γ干擾素的可溶表達(dá)及其產(chǎn)物的活性鑒定[D]. 韓陽.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[8]大菱鲆干擾素調(diào)節(jié)因子3（IRF-3）和干擾素調(diào)節(jié)因子7（IRF-7）基因克隆與表達(dá)分析[D]. 夏軍.中國海洋大學(xué) 2011
[9]豬α、γ干擾素的原核表達(dá)、純化及抗病毒活性初步檢測[D]. 趙偉鴿.上海交通大學(xué) 2010
[10]雞、鴨和犬α干擾素全基因合成、原核表達(dá)及抗病毒活性測定[D]. 胡偉娟.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009



本文編號：2992631