轉(zhuǎn)g10-epsps基因耐除草劑大豆ZUTS-33是由浙江大學(xué)研發(fā)的耐除草劑大豆品系,目前已進(jìn)入生產(chǎn)性試驗(yàn)階段。到目前為止尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)該轉(zhuǎn)基因新品種的檢測(cè)方法,因此亟需建立精準(zhǔn)的定量檢測(cè)方法為農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全管理提供技術(shù)支持。根據(jù)耐除草劑大豆ZUTS-33品系外源基因插入位點(diǎn)特異序列設(shè)計(jì)引物和TaqMan探針,利用優(yōu)化的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法評(píng)價(jià)該引物對(duì)和探針的特異性、準(zhǔn)確度、精確度和重復(fù)性,并確定此檢測(cè)方法的檢測(cè)極限（limit of detection,LOD）和定量極限（limit of quantity,LOQ）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,研究所建立的轉(zhuǎn)基因大豆ZUTS-33轉(zhuǎn)化體特異性實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法具有高度的品系鑒定特異性,準(zhǔn)確度、精確度均符合要求,重復(fù)性較好,且檢測(cè)方法的LOD達(dá)到20拷貝,LOQ達(dá)到40拷貝。研究結(jié)果為轉(zhuǎn)g10-epsps基因耐除草劑大豆ZUTS-33的身份識(shí)別和檢測(cè)監(jiān)測(cè)提供了有效的方法。 

【文章來(lái)源】：生物技術(shù)進(jìn)展. 2020,10(06)

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【部分圖文】：

實(shí)時(shí)熒光PCR引物的適用性測(cè)試

實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)體系優(yōu)化

為了驗(yàn)證適應(yīng)性試驗(yàn)篩選出的候選引物和探針組合是否僅在陽(yáng)性材料中獲得預(yù)期的擴(kuò)增,采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的轉(zhuǎn)基因大豆ZUTS-33、62種不同的主要商業(yè)化轉(zhuǎn)化體、轉(zhuǎn)基因大豆ZUTS-33陰性對(duì)照(即受體)、其他非轉(zhuǎn)基因大豆作為測(cè)試對(duì)象,進(jìn)行了特異性試驗(yàn)。測(cè)試結(jié)果(圖3)顯示,僅耐除草劑大豆ZUTS-33獲得了典型的擴(kuò)增曲線(xiàn),其余轉(zhuǎn)化體及ZUTS-33陰性對(duì)照、其他非轉(zhuǎn)基因大豆均未出現(xiàn)擴(kuò)增,表明建立的實(shí)時(shí)熒光PCR方法具有高度的特異性。2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：2991701