棉花是一種重要的經(jīng)濟(jì)作物和油料作物,組織培養(yǎng)技術(shù)對(duì)于棉花基因功能的鑒定和生物工程育種是至關(guān)重要的,但大多數(shù)棉花品種難以通過(guò)組織培養(yǎng)得到再生苗,因而對(duì)于如何高效獲得棉花再生苗的研究顯得尤為重要。許多研究表明WUSCHEL（WUS）基因不僅在植物體胚發(fā)生的過(guò)程中發(fā)揮重要作用,還能調(diào)控芽分生組織和花分生組織的形成。本研究從陸地棉中分離并克隆了兩個(gè)GhWUS基因,并將其與SRDX的融合抑制子轉(zhuǎn)化中棉所24（中24,陸地棉品種）來(lái)分析了GhWUS在棉花體細(xì)胞胚胎發(fā)生中的作用,再通過(guò)將該基因的誘導(dǎo)型表達(dá)載體轉(zhuǎn)化擬南芥進(jìn)而分析了該基因在植物體胚發(fā)生和芽再生的過(guò)程中的影響,得到了以下實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1.GhWUS影響棉花體胚發(fā)生。首先,通過(guò)qRT-PCR檢測(cè)了GhWUS基因的的表達(dá)譜,其結(jié)果顯示GhWUS在胚狀體階段的表達(dá)量較高,而在根、莖、葉中的表達(dá)量較低。其次,將GhWUS與一個(gè)抑制結(jié)構(gòu)域SRDX融合形成一個(gè)嵌合的GhWUS抑制轉(zhuǎn)錄因子并將其轉(zhuǎn)化中棉所24,發(fā)現(xiàn)該嵌合的抑制子能夠顯著抑制棉花愈傷組織向胚性愈傷組織的轉(zhuǎn)變。2.誘導(dǎo)表達(dá)GhWUS促使擬南芥幼苗根尖形成胚狀體和芽我們構(gòu)建了GhWUS的pER8... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

陸地棉各組織中GhWUSs基因的相對(duì)表達(dá)量Fig2.2：RelativeexpressionlevelsoftheGhWUSsgenesindifferenttissueofGossypiumhirsutumL.

嵌合的 GhWUS 抑制子表達(dá)載體的構(gòu)建及農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化構(gòu)建好的表達(dá)載體35S::GhWUS1a_At-SRDX 和35S::GhWUS1b_At-SRDX 載體轉(zhuǎn)入 PCR 鑒定，結(jié)果見圖 2.3。圖 2.3 左為 35S::GhWUS1a_At-SRDX 的鑒定結(jié)果，圖 hWUS1b_At-SRDX 的鑒定結(jié)果，由圖可以看出 PCR 產(chǎn)物片段與目的片段一致，說(shuō)建成功，而且已成功轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌。

計(jì)算了愈傷組織在胚性愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培育后 30，60 和 90 天的愈傷組織傷組織的分化率（形成的胚性愈傷組織占所有愈傷組織的百分比），結(jié)果顯示在圖我們可以看出，與 CK 相比，轉(zhuǎn)化 35S::GhWUS1a_At-SRDX 和 35S::GhWUS1b_愈傷組織都呈現(xiàn)非常低的分化率，表明 GhWUSs-SRDX 融合抑制子的組成型表達(dá)愈傷組織的形成。這些結(jié)果表明 GhWUSs 可能在愈傷組織向胚性愈傷組織的轉(zhuǎn)變作用。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]影響棉花愈傷組織及其體細(xì)胞胚發(fā)生的內(nèi)外因素[J]. 鄭順利,陳金湘,周仲華.  棉花科學(xué). 2013(02)
[2]多年生糧食作物研究現(xiàn)狀[J]. 陳璨,阮先樂,常云霞,陳龍.  生物學(xué)教學(xué). 2012(08)
[3]不同生長(zhǎng)素對(duì)西洋參成熟種胚及離體子葉體細(xì)胞胚發(fā)生影響研究[J]. 晉海軍,秦公偉,劉艷麗,王敏,楊曉洋,曹小勇.  中藥材. 2012(01)
[4]潮霉素對(duì)擬南芥幼苗真葉形成的影響[J]. 丁笑生,段紅英,段志坤,王少朋.  河南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2010(05)
[5]植物體細(xì)胞胚胎發(fā)生的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)[J]. 王興春,李宏,王敏,楊致榮.  生物工程學(xué)報(bào). 2010(02)
[6]棉花體細(xì)胞胚胎發(fā)生的研究進(jìn)展[J]. 武秀明,劉傳亮,張朝軍,李付廣.  植物學(xué)通報(bào). 2008(04)
[7]脫落酸在植物體細(xì)胞胚胎發(fā)生中的調(diào)控作用[J]. 霍妙娟,魏岳榮,胡家金,彭昕琴,黃秉智,楊護(hù).  中國(guó)生物工程雜志. 2007(11)
[8]水稻體細(xì)胞培養(yǎng)中胚性細(xì)胞出現(xiàn)與IAA的關(guān)系[J]. 陳以峰,周燮,湯日圣,張金渝,梅傳生.  植物學(xué)報(bào). 1998(05)
[9]小麥幼穗胚性愈傷組織誘導(dǎo)及分化過(guò)程中內(nèi)源激素的作用[J]. 李雪梅,劉熔山.  植物生理學(xué)通訊. 1994(04)

博士論文
[1]棉花體細(xì)胞胚發(fā)育組學(xué)分析及JA和ABA調(diào)控的研究[D]. 葛曉陽(yáng).中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]擬南芥STM、WUS和CLV3相互作用調(diào)控莖端分生組織干細(xì)胞活性的研究[D]. 周超.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[3]陸地棉體細(xì)胞胚胎發(fā)生關(guān)鍵基因挖掘及機(jī)理研究[D]. 鄭武.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2014
[4]擬南芥體細(xì)胞胚胎發(fā)生的機(jī)理研究[D]. 蘇英華.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008

碩士論文
[1]茉莉酸促進(jìn)棉花球形胚表皮細(xì)胞發(fā)育成體細(xì)胞胚的機(jī)理研究[D]. 吳潔.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2016
[2]陸地棉體細(xì)胞胚胎發(fā)生和植株再生體系的建立[D]. 林君.浙江大學(xué) 2006



本文編號(hào)：2986138