鹽分脅迫是全球范圍內(nèi)普遍存在的一種主要非生物脅迫,影響植物生長(zhǎng)、降低農(nóng)業(yè)生產(chǎn)力和限制區(qū)域發(fā)展。鹽堿地作為國(guó)家的重要后備土地資源,其價(jià)值不容忽視,鹽堿地的開發(fā)和利用對(duì)于解決我國(guó)土地資源短缺尤為重要。開發(fā)利用鹽堿地最經(jīng)濟(jì)有效的措施就是利用耐鹽堿植物本身對(duì)鹽堿的抗性,所以研究鹽生植物的耐鹽機(jī)理具有重要的意義。雖然國(guó)內(nèi)外對(duì)鹽生植物的研究已經(jīng)取得了一定的成果,但是對(duì)于鹽生植物耐鹽的分子機(jī)理還需要進(jìn)行深入的研究,其中二色補(bǔ)血草作為典型的泌鹽鹽生植物,其泌鹽機(jī)理還不清楚,所以本論文克隆了可能與二色補(bǔ)血草泌鹽相關(guān)的基因并分析其功能。本試驗(yàn)通過從二色補(bǔ)血草葉片中克隆到3個(gè)囊泡運(yùn)輸相關(guān)基因,并對(duì)這3個(gè)基因的功能做進(jìn)一步的研究:（1）對(duì)3個(gè)基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析。（2）在二色補(bǔ)血草中過量表達(dá)分析。（3）利用CRISPR-Cas9技術(shù)分別將二色補(bǔ)血草中的3個(gè)基因敲除,進(jìn)一步驗(yàn)證該類基因的功能。（4）在擬南芥中進(jìn)行過量表達(dá)分析。（5）研究擬南芥囊泡運(yùn)輸相關(guān)基因缺失的突變體植株。主要試驗(yàn)結(jié)果如下:1.根據(jù)二色補(bǔ)血草RNASeq的結(jié)果,我們得到了3個(gè)與二色補(bǔ)血草囊泡運(yùn)輸相關(guān)基因,分別為L(zhǎng)B00297、LB11044... 

【文章來(lái)源】：山東師范大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：86 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

A，提取二色補(bǔ)血草葉片RNA的TAE電泳結(jié)果；B，C，D分別是

B，C 分別是 LB11277、LB11044 和 LB00297 的 3'PCR 產(chǎn)物，D、E、F分別是 LB11277、LB11044 和 LB00297 的 5'PCR 產(chǎn)物。其中 1，2，3，4 分別是1st PCR 產(chǎn)物、負(fù)對(duì)照、2nd PCR 產(chǎn)物、負(fù)對(duì)照；5，6 分別是 1st PCR 產(chǎn)物、2nd PCR 產(chǎn)物；M：標(biāo)準(zhǔn)分子量為 2000 的 DNA Marker。Fig.1-2 A, B, C: The 3'partial fragment of LB11277, LB11044 and LB00297 from PCR;D, E, F: The 5'partial fragment of LB11277, LB11044 and LB00297 from PCR;1, 2, 3, 4: 1st gene from PCR, negative control, 2nd gene from PCR, negative control;5, 6: 1st gene from PCR, 2nd gene from PCR; M: DL2000 DNA Marker.3.3 RACE 后全長(zhǎng)基因片段的獲得如圖 1-3，A、B 和 C 第 1 泳道分別是 LB11277、LB11044 和 LB00297 的全長(zhǎng)序列，預(yù)計(jì)條帶分別約 1.5 kbp、1.3 kbp 和 0.9 kbp。將得到的 PCR 產(chǎn)物送至測(cè)序公司測(cè)序，測(cè)序得到的序列在 NCBI 網(wǎng)站上進(jìn)行 Blast 分析。獲得的 LB00297 基因的片段大小為 1066 bp，該基因共有編碼序列 660 bp，

山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文11277 基因的片段大小為 1478 bp，如表 1-6醉蝶花（Tarenaya hassleriana）的囊泡膜蛋4%。該基因共有編碼序列 717 bp，編碼 238與擬南芥中的囊泡運(yùn)輸基因 AT4G00170 進(jìn)行-6）。

【參考文獻(xiàn)】：
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