研究目的:家族性腎性糖尿（FRG）是一種罕見(jiàn)的腎小管疾病,其特征是孤立的持續(xù)性葡萄糖尿,無(wú)糖代謝異常和任何其他近端腎小管功能障礙的癥狀。絕大多數(shù)FRG患者由SLC5A2基因（OMIM182381）突變所致。本研究旨在進(jìn)一步擴(kuò)大FRG患者的SLC5A2基因突變分析,探討基因型與腎糖閾（RTG）之間的聯(lián)系。再者,基于所報(bào)道的SLC5A2外顯子變異缺乏mRNA水平的研究,本研究也探索了點(diǎn)突變對(duì)前體mRNA剪接的影響。研究方法:1檢測(cè)9個(gè)FRG家系25位家庭成員的24小時(shí)尿葡萄糖定量和腎葡萄糖閾值。PCR法擴(kuò)增SLC5A2全部編碼區(qū)及其側(cè)翼序列,直接測(cè)序法分析基因突變特點(diǎn)。比較不同基因型患者（雜合子和復(fù)合雜合子;c.886（-10_-31）del雜合子和其他雜合子）腎糖閾的差異。2運(yùn)用生物信息學(xué)在線軟件（BDGP和HSF 3.1）預(yù)測(cè)人類基因突變數(shù)據(jù)庫(kù)（HGMD,2019.01）已經(jīng)報(bào)道的假定的SLC5A2錯(cuò)義突變,篩選對(duì)經(jīng)典剪接位點(diǎn)和剪接調(diào)控序列如外顯子剪接增強(qiáng)子（ESEs）和外顯子剪接沉默子（ESSs）有潛在影響的點(diǎn)突變。采用構(gòu)建迷你基因的方法驗(yàn)證候選外顯子突變對(duì)剪接的... 

【文章來(lái)源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：52 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２本研宄中的復(fù)合雜合突變與雜合突變患者以及ｃ．８８６（－１０＿－３１＞ｄｅｌ與其他雜合突變患者間腎??

圖３本研宄中納入的從Ｃ５Ａ錯(cuò)義變異的位置和迷你基因的示意圖

結(jié)果??內(nèi)含子序列（距３號(hào)外顯子５’末端的內(nèi)含子序列大�。海担担猓穑啵程�(hào)外顯子３’末端??的內(nèi)含子序列大�。海玻埃常猓穑┘跋鄳�(yīng)的突變型迷你基園。野生型（ｐＳＰＬ３Ｅｘ３）和突??變型（ｃ．２１６Ｃ＞Ａ和ｃ．２９４Ｃ＞Ａ）迷你基因被轉(zhuǎn)染入ＨＥＫ２９３Ｔ細(xì)胞中ＲＴ－ＰＣＲ實(shí)驗(yàn)??結(jié)果示，對(duì)照組產(chǎn)生２條電泳帶（３６８?ｂｐ的含有３號(hào)外甚子的條帶，２６３?ｂｐ不含該??外顯子的條帶），而兩個(gè)突變型的均只產(chǎn)生一條２６３?ｂｐ的條帶（圖５）?直接測(cè)序??結(jié)果表明２６３?ｂｐ的條帶為ｐＳＰＬ３載體上兩個(gè)０有的外顯子序列。因此，這兩個(gè)突變??均導(dǎo)致３號(hào)外顯子的跳躍。ｍＲＮＡ轉(zhuǎn)錄本中缺失３號(hào)外顯子將導(dǎo)致ＳＧＬＴ２蛋白缺??失３５個(gè)氣基酸（第６７－１０１位氨基酸），但并不引起開(kāi)放閱讀框的移碼突變。我們??考慮ｃ．２１６Ｃ＞Ａ和ｃ．２９４Ｃ＞Ａ突變產(chǎn)生剪接突變的原＿為突變所在的３號(hào)外顯子存在??較弱的剪接供點(diǎn)（得分〇．〇〇，ＢＤＧＰ分析），相應(yīng)位．點(diǎn)的突變導(dǎo)致ＥＳＥｓ的破壞及??ＥＳＳｓ的形成，ＥＳＳｓ招募ｈｎＲＮＰＡｌ，抑制臨近剪接位點(diǎn)的識(shí)別力量和剪接效應(yīng)，進(jìn)??而抑制剪接識(shí)別力＿＾最終導(dǎo)致３號(hào)外顯子跳躍。??５００ｂｐＢ??ｂｐ?２５０?ｂｐ?■??１００?ｂｐ?｜??Ｂ?／?Ｃ?，＼???ｐＳＰＬ３?ｅｘｏｎ?５＊?ｉ?＜ｐＳＰＬ３?ｅｘｏｎ?３’???ｐＳＰＬ３?ｅｘｏｎ?５＊?ｊ?ｐＳＰＬ３?ｅｘｏｎ?３’???ＣＴＣＴＡＧＡＧＴＣＧＡＣＣＣＡＧＣＡＡＣＣＴＧ?６?ＡＧＡＴＣＴＣＣＣＧＡＧＧＧ?Ｃ?ＴＣＴＡＧＡＧＴＣＧＡＣＣＣＡ６?ＣＡＡＣＣＴＧ?ＧＡＧＡＴＣＴＣＣＣＧＡＧＧＧ??ＷＴ?Ｂ?Ｅｘ３?ＫＢ


本文編號(hào)：2980727