多殺性巴氏桿菌（Pasteurella multocida,P.multocida）是導(dǎo)致中國生豬產(chǎn)業(yè)中主要的一種細菌性疾病,主要引起豬肺炎,萎縮性鼻炎。由于P.multocida血清型眾多,且各血清型之間的交叉保護尚不明確,因此尚需對P.multocida的抗原類型、免疫機制等進行更深入的研究。本次課題選用OmpA、OmpH、plpP和plpE四個保護性抗原作為研究對象,體外重組表達并配制成亞單位疫苗,以小鼠為實驗動物進行免疫攻毒保護試驗,為進一步探索、開發(fā)豬源多殺性巴氏桿菌亞單位疫苗研提供資料積累。1、本試驗采用PCR方法,以本實驗室保存的PmA8.1菌株DNA為模板克隆了OmpA、OmpH、plpP和plpE四個保護性抗原基因,并構(gòu)建至pET-28（a）載體中,獲得了pET28-OmpA、pET28-OmpH、pET28-plpE和pET28-plpP四個重組表達質(zhì)粒,將體外表達重組蛋白用鋁膠佐劑、弗氏佐劑和ISA201佐劑分別配制成亞單位疫苗接種免疫小鼠進行攻毒實驗,結(jié)果顯示,四個重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）后,經(jīng)誘導(dǎo)表達OmpA、OmpH、plpE均為包涵體表達... 

【文章來源】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

plpP和OmpH保護性抗原基因PCR擴增圖

plpP、plpE及OmpH陽性轉(zhuǎn)化子鑒定結(jié)果

15圖2-1plpP和OmpH保護性抗原基因PCR擴增圖Fig.2-1protectiveantigensgeneofplpPandOmpHwereamplifiedbyPCR1：plpP；2：OmpH；M：DL2000DNAMarker2.3.2重組質(zhì)粒構(gòu)建與陽性轉(zhuǎn)化子鑒定結(jié)果①將擴增的plpP和OmpH的產(chǎn)物經(jīng)PCR清潔后與pET-28用、BamHⅠ和SacⅠ雙酶切后經(jīng)瓊脂糖電泳結(jié)果如下：圖2-2plpP、OmpH和pET-28質(zhì)粒雙酶切結(jié)果Fig.2-2plpP、OmpHandpET-28a(+)Plasmiddoubledigestionresults1：plpP酶切后；2：OmpH酶切后；3：pET-28酶切后；M：DL2000DNAMarker②用pET-28通用引物對挑選的疑似陽性轉(zhuǎn)化子進行PCR鑒定，電泳結(jié)果顯示擴增條帶均與預(yù)期目的條帶相符，從左至右順序分別是BL21（DE3）-pET28-plpP、BL21（DE3）-pET28-plpE、BL21（DE3）-pET28-ompH，如圖2-3。圖2-3plpP、plpE及OmpH陽性轉(zhuǎn)化子鑒定結(jié)果

【參考文獻】：
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碩士論文
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本文編號：2975483