多殺性巴氏桿菌（Pasteurella multocida,P.multocida）是導(dǎo)致中國(guó)生豬產(chǎn)業(yè)中主要的一種細(xì)菌性疾病,主要引起豬肺炎,萎縮性鼻炎。由于P.multocida血清型眾多,且各血清型之間的交叉保護(hù)尚不明確,因此尚需對(duì)P.multocida的抗原類(lèi)型、免疫機(jī)制等進(jìn)行更深入的研究。本次課題選用OmpA、OmpH、plpP和plpE四個(gè)保護(hù)性抗原作為研究對(duì)象,體外重組表達(dá)并配制成亞單位疫苗,以小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行免疫攻毒保護(hù)試驗(yàn),為進(jìn)一步探索、開(kāi)發(fā)豬源多殺性巴氏桿菌亞單位疫苗研提供資料積累。1、本試驗(yàn)采用PCR方法,以本實(shí)驗(yàn)室保存的PmA8.1菌株DNA為模板克隆了OmpA、OmpH、plpP和plpE四個(gè)保護(hù)性抗原基因,并構(gòu)建至pET-28（a）載體中,獲得了pET28-OmpA、pET28-OmpH、pET28-plpE和pET28-plpP四個(gè)重組表達(dá)質(zhì)粒,將體外表達(dá)重組蛋白用鋁膠佐劑、弗氏佐劑和ISA201佐劑分別配制成亞單位疫苗接種免疫小鼠進(jìn)行攻毒實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示,四個(gè)重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）后,經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)OmpA、OmpH、plpE均為包涵體表達(dá)... 

【文章來(lái)源】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)湖南省

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

plpP和OmpH保護(hù)性抗原基因PCR擴(kuò)增圖

plpP、plpE及OmpH陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子鑒定結(jié)果

15圖2-1plpP和OmpH保護(hù)性抗原基因PCR擴(kuò)增圖Fig.2-1protectiveantigensgeneofplpPandOmpHwereamplifiedbyPCR1：plpP；2：OmpH；M：DL2000DNAMarker2.3.2重組質(zhì)粒構(gòu)建與陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子鑒定結(jié)果①將擴(kuò)增的plpP和OmpH的產(chǎn)物經(jīng)PCR清潔后與pET-28用、BamHⅠ和SacⅠ雙酶切后經(jīng)瓊脂糖電泳結(jié)果如下：圖2-2plpP、OmpH和pET-28質(zhì)粒雙酶切結(jié)果Fig.2-2plpP、OmpHandpET-28a(+)Plasmiddoubledigestionresults1：plpP酶切后；2：OmpH酶切后；3：pET-28酶切后；M：DL2000DNAMarker②用pET-28通用引物對(duì)挑選的疑似陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子進(jìn)行PCR鑒定，電泳結(jié)果顯示擴(kuò)增條帶均與預(yù)期目的條帶相符，從左至右順序分別是BL21（DE3）-pET28-plpP、BL21（DE3）-pET28-plpE、BL21（DE3）-pET28-ompH，如圖2-3。圖2-3plpP、plpE及OmpH陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子鑒定結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]我國(guó)部分省區(qū)豬源多殺性巴氏桿菌的分子流行病學(xué)調(diào)查[D]. 王豪男.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
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[3]湖南省豬源多殺性巴氏桿菌血清型鑒定及F型的致病性研究[D]. 方超.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
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[6]豬多殺性巴氏桿菌PlpB與Fur基因融合表達(dá)及免疫效果評(píng)價(jià)[D]. 蔣惠婷.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 2014
[7]大腸桿菌LTB聯(lián)合EV71亞單位疫苗VP1鼻腔免疫效果評(píng)價(jià)[D]. 謝婷婷.重慶醫(yī)科大學(xué) 2014
[8]以大腸桿菌LTB為載體的PEDV亞單位疫苗及其佐劑研究[D]. 黃春娟.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[9]豬源多殺性巴氏桿菌plpE基因的克隆、原核表達(dá)及其免疫原性研究[D]. 黃海燕.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[10]豬多殺性巴氏桿菌分離鑒定及其PMT毒素免疫原性研究[D]. 張軍虎.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011



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