目的:多發(fā)性骨髓瘤（multiplemyeloma,MM）是一種具有廣泛基因異質(zhì)性的疾病,其發(fā)生機(jī)制除了要經(jīng)歷免疫球蛋白重鏈基因重排以外,還要經(jīng)歷體細(xì)胞高頻突變,其中主要突變包括KRAS、NRS、BR4F等基因突變,這些突變可能與MM克隆演變、細(xì)胞耐藥與預(yù)后密切相關(guān)。本研究目的主要包括:1.探究KRAS、NRAS、BRAF基因突變在MM患者中的表達(dá)情況及這些基因突變是否與MM不良預(yù)后相關(guān)。2.探究數(shù)字微滴 PCR（droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR）方法檢測上述基因突變的可行性,以及采用該手段檢測外周血循環(huán)腫瘤DNA（circulating tumor DNA,ctDNA）基因突變與骨髓樣本檢出率的一致性。3.探究泛Raf抑制劑LY3009120抗MM細(xì)胞增殖的作用機(jī)制。方法:1.ddPCR方法檢測MM患者KRAS、NRAS、BRAF基因突變情況:以天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院血液科2010年至2016年收治的85例初診MM患者為研究對象,與患者簽署知情同意書后,提取骨髓單個核細(xì)胞、骨髓漿、外周血ctDNA,采用ddPCR的方法檢測B... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：107 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

移液槍轉(zhuǎn)移混合物操作示意圖

連孔盒轉(zhuǎn)移到８連孔支架上（也可先將８連孔盒放后在轉(zhuǎn)移混合物），在支架的兩端套上膠墊，保證響液滴生成。??色按鈕打開液滴生成器，將８連孔支架連同８連孔，保證放置位置準(zhǔn)確，液滴生成器中間指示燈呈按下液滴生成器綠色按鈕，液滴生成器關(guān)閉開始生示燈閃爍表示液滴正在生成，當(dāng)液滴生成完畢后３常殼。??色按鈕打開液滴生成器取出支架，丟棄膠墊，在８到明顯的液滴，樣品孔和液滴生成油孔內(nèi)幾乎沒有作要平穩(wěn)緩慢，避免液滴破碎）。??及ＰＣＲ反應(yīng)??液槍調(diào)至４０ｕｌ，從８連孔盒液滴孔內(nèi)緩慢的吸取液孔底部并且與孔壁保持３（Ｔ－４０？角（圖３），吸取能高于８ｕｌ每秒。??ｉｅｔｔｉ

者血漿ｃｔＤＮＡ中檢測出５兄４ＦＭ：突變而骨髓單個核中未檢出；１例患者骨髓單??個核檢測出以突變而血漿ｃｔＤＮＡ中未檢出；１例患者骨髓單個核中檢測??出尺Ｍｅ突變，血漿和骨髓漿ｃｔＤＮＡ中均未檢出。（圖２，表２）??表１．ＭＭ患者流行病學(xué)資料?表２．不同樣本ＲＡＳ／ＲＡＦ基因突變??．．?Ｎｏ．?ｏｆ?ｐａｔｉｅｎｔｓ?ｎ〇．?ｏｆ??ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ?Ｍｕｔａｔｉｏｎ?ｔｅｓｔ??ｕ＝８５）?ｐａｔｉｅｎｔｓ??Ａｇｅ?（ｍｅｄｉａ?ｉｎ?ｙｅａｒｓ）?６３?（４０￣８２）?Ｂｏｎｅ?ｍａｒｒｏｗ?ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ?ｃｅｌｌｓ?８５??Ｇｅｎｄｅｒ?ＢＲＡＦＶ６００?４?（５％）??Ｍａｌｅ?５５?（６４．７％）?ＫＲＡＳＧ１２／Ｇ１３?１５?（１８％）??Ｆｅｍａｌｅ?３０?（３５．３）?ＮＲＡＳＧ１２／Ｇ１３?３?（４％）??Ｓｔａｇｅ?ＮＲＡＳ０６１?１５?（１８％）??Ｉ?Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ?ｂｌｏｏｄ?ｓｅｒｕｍ?２０??ｎ?２４?ＢＲＡＦＶ６


本文編號：2973705