GDP-甘露糖為黨參多糖合成的重要前體物質(zhì),參與糖鏈的合成。磷酸甘露糖變位酶（phosphomannomutase,PMM）催化甘露糖-6-磷酸（Man-6-P）向甘露糖-1-磷酸（Man-1-P）轉(zhuǎn)化,從而合成GDP-甘露糖。該研究依據(jù)黨參Codonopsis pilosula轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中PMM基因序列信息,設(shè)計(jì)特異性引物,克隆得到了黨參PMM基因全長(zhǎng),命名為CpPMM。通過生物信息學(xué)、原核表達(dá)以及qRT-PCR技術(shù)分析CpPMM基因的表達(dá)與黨參多糖合成之間的相關(guān)性。結(jié)果顯示,CpPMM基因包含1個(gè)741 bp的開放閱讀框（ORF）,編碼246個(gè)氨基酸,與其他物種的PMM具有高度相似性,同菊科向日葵具有高度同源性,預(yù)測(cè)為親水性非跨膜蛋白,無信號(hào)肽,預(yù)測(cè)其定位于細(xì)胞質(zhì)中,含有多個(gè)磷酸化位點(diǎn),結(jié)合保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)分析,該蛋白屬于HAD（haloacid dehalogenase,鹵素脫氫酶）超家族;原核表達(dá)研究顯示,CpPMM融合蛋白大小約為29 kDa,同預(yù)測(cè)相對(duì)分子質(zhì)量基本相似,目的蛋白為包涵體,部分可溶;qRT-PCR結(jié)果表明,CpPMM基因具有時(shí)空表達(dá)特異性,結(jié)果期表達(dá)量顯著高于盛... 

【文章來源】：中國(guó)中藥雜志. 2020,45(18)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：10 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料
    1.1 儀器與試劑
    1.2 試驗(yàn)樣品
2 方法
    2.1 CpPMM基因全長(zhǎng)cDNA的擴(kuò)增
    2.2 CpPMM基因的生物信息學(xué)分析
    2.3 CpPMM基因原核表達(dá)分析
        2.3.1 CpPMM基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.3.2 pET-28a-CpPMM重組蛋白原核表達(dá)分析
        2.3.3 pET-28a-CpPMM重組蛋白的可溶性分析
    2.4 黨參CpPMM基因不同發(fā)育時(shí)期根系表達(dá)分析
    2.5 黨參多糖含量測(cè)定
3 結(jié)果與分析
    3.1 黨參CpPMM基因cDNA序列的克隆
    3.2 黨參CpPMM基因的生物信息學(xué)分析
    3.3 CpPMM氨基酸序列同源性比對(duì)與進(jìn)化分析
    3.4 CpPMM基因原核表達(dá)分析
        3.4.1 CpPMM基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.4.2 pET-28a-CpPMM在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)及條件優(yōu)化
        3.4.3 pET-28a-CpPMM重組蛋白的可溶性檢測(cè)
    3.5 黨參CpPMM基因不同發(fā)育時(shí)期根系表達(dá)分析
    3.6 黨參多糖含量的測(cè)定
4 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]栽培措施對(duì)黨參生長(zhǎng)和有效成分含量影響研究[D]. 胡佳棟.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2019
[2]向日葵莖芯多糖抗肺癌轉(zhuǎn)移的活性與機(jī)制研究[D]. 吳比.東北林業(yè)大學(xué) 2019
[3]枸杞成熟過程中多糖差異分析及蛋白組學(xué)研究[D]. 趙宇慧.寧夏大學(xué) 2018
[4]黨參多糖含量和組成分析及其對(duì)質(zhì)粒DNA的保護(hù)作用研究[D]. 陳克克.陜西師范大學(xué) 2007



本文編號(hào)：2971468