胃癌是最常見的腫瘤之一,其發(fā)病率和死亡率在全球居于第五和第三,中國也是胃癌大國,僅次于肺癌。目前用于胃癌研究的小鼠原發(fā)性腫瘤模型造模時間長,成功率低。隨著CRISPR/Cas9基因編輯技術在腫瘤造模中的廣泛應用,針對肺癌、肝癌等的小鼠原發(fā)腫瘤模型可以快速、高效建立,幫助揭示了不同類型腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機制,但基于CRISPR技術的小鼠原發(fā)性胃癌模型未見報導。本研究將34個抑癌基因的sg RNA文庫以及Cas9基因通過胃黏膜高壓注射導入胃部細胞,利用CRISPR/Cas9技術體內編輯抑癌基因,大約7周內誘導了胃癌的形成;利用免疫組化和PCR靶向擴增子二代測序等技術和方法,分析腫瘤結節(jié)、對應的癌旁組織、腫瘤原代細胞及單克隆,構建其抑癌基因編輯突變圖譜,發(fā)現(xiàn)在腫瘤組織中胃癌常見的抑癌基因發(fā)生了高頻率的突變,包括p53,Arid1a,Apc,Smad4,Pten等。根據(jù)突變圖譜,進一步從34個抑癌基因sg RNA文庫中選出12個sg RNA組裝成一個小文庫,這個小文庫也能在3個月內成功誘導胃部腫瘤的形成,其中p53、Arid1b、Smad4和Pten也發(fā)生了高頻突變,特別是在兩個不同文庫誘導成... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

靶向抑癌基因文庫信息

浙江大學碩士學位論文正文結果26圖2CRISPR技術成功誘導小鼠產生胃癌（A.實驗組和對照組小鼠胃部解剖大體觀圖，5-8號小鼠為對照組小鼠（綠色文本），9-12號小鼠為實驗組小鼠（紅色文本）；B.實驗組和對照組小鼠胃黏膜高壓注射后體重變化折線圖；C.實驗組和對照組小鼠胃部腫瘤體積（1/2和腫瘤寬度2×腫瘤長度）差異圖；D.腫瘤

浙江大學碩士學位論文正文結果28圖3CRISPR誘導小鼠產生胃癌的免疫組化結果3.4胃癌靶向基因編輯圖譜本研究通過對產生腫瘤的癌旁組織，腫瘤組織和對應的原代細胞進行PCR擴增子二代深度測序來分析靶向位點的編輯情況，為了避免測序誤差的影響，本研究排除了基因編輯位點的編輯頻率小于5%的情況�？偣矞y序12個樣本，其中4個癌旁組織，4個腫瘤組織和對應的原代腫瘤細胞（圖4A）。就9號小鼠所產生的癌旁組織（NT9）,腫瘤組織（T9）和原代細胞（C9）而言（圖4B），發(fā)生靶向編輯的個數(shù)占總位點的個數(shù)的比率分別為5.9%（2/34），82.35%（28/34）和79.41%（27/34）。樣本NT9的Arid1b（100%）和Mlh1（21.95%）發(fā)生了編輯；T9除Apc、Atm、Axin1、Chd1、Fbxw7和Rps6ka3未發(fā)生編輯外，其余位點均


本文編號：2968747