柴胡是我國常用中藥材之一,也是多種中成藥的重要原料。柴胡含有多種化學(xué)成分,其中,合成途徑研究較多的成分為柴胡皂苷。在柴胡皂苷的合成途徑中,三萜皂苷骨架經(jīng)細(xì)胞色素P450單加氧酶、糖基轉(zhuǎn)移酶及其它后修飾酶催化后形成柴胡皂苷。CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)因其具備簡(jiǎn)單、省時(shí)、高效的優(yōu)勢(shì),已廣泛應(yīng)用于玉米、水稻、擬南芥等植物的基因功能研究中。本文開展以下兩部分研究:一、構(gòu)建柴胡糖基轉(zhuǎn)移酶BcUGT3基因的過表達(dá)載體,通過發(fā)根農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化獲得柴胡轉(zhuǎn)基因毛狀根,初步對(duì)該基因的功能進(jìn)行研究,為其它糖基轉(zhuǎn)移酶基因的功能研究奠定基礎(chǔ);二、借助于柴胡毛狀根遺傳轉(zhuǎn)化體系,嘗試CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)在柴胡中的應(yīng)用,為后續(xù)將該技術(shù)應(yīng)用于柴胡BcUGT3基因及其它基因的功能研究提供參考。具體研究結(jié)果如下:1.以柴胡無菌苗為外植體,通過發(fā)根農(nóng)桿菌SW101介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化誘導(dǎo)毛狀根,抑菌培養(yǎng)20天左右開始發(fā)根,最終獲得20個(gè)BcUGT3-pK7WG2D轉(zhuǎn)基因毛狀根,利用熒光定量PCR對(duì)轉(zhuǎn)基因毛狀根進(jìn)行BcUGT3基因和β-AS基因的過表達(dá)情況進(jìn)行分析,初步推測(cè)BcUGT3基因可能參與柴胡皂苷... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１?ＭＶＡ途徑和ＭＥＰ途徑??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?ＭＶＡ?ｐａｔｈｗａｙ?ａｎｄ?ＭＥ?

?第一章文獻(xiàn)綜述???基因的啟動(dòng)子序列，且篩選出與該啟動(dòng)子互作的堿性亮氨酸拉鏈類（ｂＺＩＰ）轉(zhuǎn)錄因??子５ｃ７Ｆ５；?Ｌｉｎ等＿從高氏柴胡（５．?ｔｏｏ／）中成功克隆到一個(gè)界ＡＳ基因，并將該基??因的開放閱讀框連接并轉(zhuǎn)化釀酒酵母（ｉＳａｃｃ／７ａｒａｗ＿ｙｃａｃｅｒｅＷ５７＇ａｅ）中，對(duì)積累產(chǎn)物??進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)該基因即可編碼形成Ｐ－香樹脂合酶。本課題組也曾克隆到５ｃｔ／Ｇ７７、??（登錄號(hào)：ＪＦ８０３８１９）、價(jià)呢幾（登錄號(hào)：ＪＦ８０３８２２）、（登錄??號(hào)：ＫＣ４６４４６１）、５ｃＣ／Ｇ７７０?（登錄號(hào)：ＪＱ２４７６８９）、ＣＴＰＳ７五等基因的全長(zhǎng)，并對(duì)??一堅(jiān)基因進(jìn)行了原核表達(dá)分析［３１＿３４］。Ｍｏｓｅｓ等［３５］從三島柴胡中克隆得到Ｐ４５０酶基??因Ｃ１Ｔ７ＭＦ／，該基因可催化齊墩果烷型和烏蘇烷型三萜骨架Ｃ－１６ａ的羥基化。??

?第一章文獻(xiàn)綜述???元表達(dá)載體，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)靶基因的編輯；另外，有些研究１１１９－１２（）］則分別構(gòu)建了?ｇＲＮＡ??和Ｃａｓ９載體，然后通過不同的轉(zhuǎn)化方法將載體導(dǎo)入植物細(xì)胞、組織或器官，從而??發(fā)揮基因編輯的作用。而重組載體轉(zhuǎn)化植物的方法有很多種，例如農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)??化、ＰＥＧ介導(dǎo)的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染和基因槍轟擊等方法，但是采用怎樣的轉(zhuǎn)化方法能夠??實(shí)現(xiàn)靶基因的高效編輯面臨巨大挑戰(zhàn)（圖］－５）。??


本文編號(hào)：2968249