為了對(duì)羊口瘡病毒（ORFV）陜西分離株B2L基因進(jìn)行克隆、序列分析及原核表達(dá),根據(jù)GenBank已登錄的ORFV（JN565694.1）B2L基因序列,設(shè)計(jì)合成一對(duì)特異性引物,應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增ORFV B2L基因,并將目的基因連接到原核表達(dá)載體pET-28a中,成功構(gòu)建重組質(zhì)粒PET28a-B2L,轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21感受態(tài)細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),并進(jìn)行SDS-PAGE和Western blot分析。結(jié)果表明,成功克隆了ORFV陜西分離株B2L全基因序列,核苷酸序列分析表明,陜西分離株B2L基因與國(guó)內(nèi)外已報(bào)道的ORFV毒株核苷酸同源性超過(guò)97.3%,氨基酸同源性超過(guò)95.0%。重組菌經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后成功表達(dá)分子質(zhì)量約為42ku的重組蛋白,該蛋白能與羊口瘡陽(yáng)性血清特異性結(jié)合,具有良好的反應(yīng)原性。研究結(jié)果為ORFV的分子生物學(xué)特性研究提供資料,為進(jìn)一步研制ORFV單克隆抗體及抗體檢測(cè)ELISA試劑盒奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2016,37(12)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 病毒、菌種、質(zhì)粒和細(xì)胞株
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 血清
    1.2 方法
        1.2.1 引物的設(shè)計(jì)及病毒核酸的提取
        1.2.2 B2L基因的克隆及序列分析
        1.2.3 重組蛋白B2L的誘導(dǎo)表達(dá)及表達(dá)條件優(yōu)化
        1.2.4 重組蛋白B2L表達(dá)形式的分析
        1.2.5 目的蛋白的Western blot分析
2 結(jié)果
    2.1 PCR擴(kuò)增結(jié)果
    2.2 重組質(zhì)粒pET-B2L雙酶切鑒定結(jié)果
    2.3 B2L目的基因同源性及進(jìn)化樹(shù)分析
    2.4 B2L基因編碼氨基酸親水性及抗原表位分析
    2.5 重組蛋白誘導(dǎo)表達(dá)條件的優(yōu)化
    2.6 重組蛋白B2L表達(dá)形式的分析
    2.7 重組蛋白的Western blot分析
3 討論
    3.1 B2L序列分析
    3.2 親水性、抗原表位分析
    3.3 B2L蛋白原核表達(dá)分析


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]口瘡病毒XC13株的分離鑒定[J]. 鄧宇.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2015(05)
[2]羊口瘡病毒B2L基因克隆及表達(dá)[J]. 趙文博,李瑞航,賀鵬亮,李朋婭,王夢(mèng)醒,楊春華,于永忠,崔玉東.  黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報(bào). 2015(02)
[3]楊凌某羊場(chǎng)羊口瘡病毒的分離鑒定[J]. 張瑜,高晶暉,張立強(qiáng),高洋,賈云曉,陳德坤.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2015(01)
[4]羊口瘡病毒新疆流行株的分離鑒定及其遺傳進(jìn)化分析[J]. 楊海波,孟慶玲,喬軍,才學(xué)鵬,賀志昊,劉昱成,彭葉龍,王國(guó)超,陳創(chuàng)夫,都曼·努爾坎杰.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2015(02)
[5]羊口瘡病毒分子生物學(xué)的研究進(jìn)展[J]. 閆豐超,邵佳,竇永喜.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2013(01)

碩士論文
[1]楊凌地區(qū)羊口瘡流行病學(xué)調(diào)查、病毒分離鑒定及相關(guān)基因的生物信息學(xué)分析[D]. 劉方.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2014



本文編號(hào)：2965982