目的利用短發(fā)夾 RNA (shRNA) 技術(shù)構(gòu)建 TRPV2 基因的沉默表達慢病毒載體,探究其在大鼠脊柱側(cè)凸模型椎間盤退變中的作用。方法本研究采用經(jīng)典的雙足大鼠脊柱側(cè)凸模型構(gòu)建的方法。根據(jù)基因沉默干擾原理,構(gòu)建 shRNA TRPV2 干擾載體,根據(jù)實驗目的,將 SD 大鼠分成對照組、模型組和 shRNA 組。對上述動物模型攝 X 線片,對椎間盤髓核組織進行 HE 染色,對椎間盤髓核組織進行 II 型膠原蛋白和 Aggrecan 蛋白的免疫組織化學染色,利用 RT-PCR 和 Western blot 檢測髓核組織中炎性因子 iNOS、COX-2、MMP-9 和凋亡因子 Caspase-6、Caspase-3 和 Caspase-9 的 mRNA 和蛋白表達水平。結(jié)果慢病毒量轉(zhuǎn)染效率較高,為 (92.3±2.7) %。對照組 SD 大鼠無明顯側(cè)凸,模型組 SD 大鼠脊柱向左側(cè)凸,Cobb’s角為(31.22±2.18) °;shRNA 組 SD 大鼠脊柱向左側(cè)凸,Cobb’s角為 (18.07±3.09) °。RT-PCR 結(jié)果顯示,模型組髓核組織中炎性因子 iNOS、COX-2、MM...

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圖4 Western blot表達結(jié)果

圖3髓核組織中mRNA的相對表達水平圖5髓核組織HE染色結(jié)果(×200)

圖 1 慢病毒轉(zhuǎn)染效率檢測。shRNA-TRPV2 的載體可以通過慢病毒轉(zhuǎn)入細胞內(nèi),可被激發(fā)出綠色熒光。慢病毒轉(zhuǎn)染效率=熒光下視野細胞數(shù) / 白光下視野細胞數(shù) × 100%

表1目的基因的引物序列Tab.1Primersequenceoftargetgenes引物名稱引物序列iNOS正義鏈5’-CATGGCTTTGGATGGAGAGT-3’反義鏈5’-TGGGAGTTTGCTCTTCAAGG-3’COX-2正義鏈5’....

圖2 影像學資料

圖1慢病毒轉(zhuǎn)染效率檢測。shRNA-TRPV2的載體可以通過慢病毒轉(zhuǎn)入細胞內(nèi),可被激發(fā)出綠色熒光。慢病毒轉(zhuǎn)染效率=熒光下視野細胞數(shù)/白光下視野細胞數(shù)×100%結(jié)果顯示,模型組髓核組織中炎性因子iNOS、COX-2、MMP-9和凋亡相關(guān)因子Caspase-3,6....

圖3 髓核組織中mRNA的相對表達水平

既往研究主要針對AIS病因?qū)W,而病因?qū)W研究的重點在于動物模型的構(gòu)建[9-10]。有學者對4足哺乳動物SD大鼠采用切除大腦松果體和4足哺乳動物腹腔注射褪黑素抑制劑的方法構(gòu)建SD大鼠的脊柱側(cè)凸模型,結(jié)果兩組4足SD大鼠均未發(fā)生脊柱側(cè)凸。而采用切除前足的方法....

本文編號：4012681