玉米是一年生禾本科的草本植物,是重要的糧食作物和飼料來源。隨著我國經濟不斷發(fā)展,人口數量逐年遞增,玉米深加工業(yè)的快速發(fā)展,國內市場對玉米的需求量越來越大。因此,創(chuàng)制高產優(yōu)質的玉米新種質,培育玉米新品種具有重要意義。在玉米中,發(fā)現了兩個磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）基因,分別為ZmPCK1和ZmPCK2,ZmPCK2基因表達部位主要在胚乳和發(fā)育的胚中,該基因可能影響玉米產量和玉米籽粒品質,因此,本研究通過農桿菌介導法,將三種植物表達載體pCRISPR/Cas9-ZmPCK2、pCAMBIA3301-35S-ZmPCK2-Nos-GFP、pCAMBIA3301-35S-ZmPCK2-Nos-RNAi轉入到玉米中,以H99玉米愈傷組織為受體材料,進行遺傳轉化實驗。通過對轉基因植株的分子檢測、農藝性狀調查和轉基因種子的品質性狀檢測,進一步驗證ZmPCK2基因的功能,為玉米品質性狀改良奠定基礎。得到的實驗成果如下:1.采用玉米幼胚為受體材料,利用農桿菌介導植物表達載體pCAMBIA1300-35S-GUS-Nos侵染玉米幼胚,以GUS基因瞬時表達率為指標,通過單因素試驗及四因素三水平正交試... 

【文章來源】：吉林農業(yè)大學吉林省

【文章頁數】：66 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

重組質粒轉化農桿菌的PCR驗證A.pCRISPR/Cas9-ZmPCK2的驗證；B.pCAMBIA3301-35S-ZmPCK2-Nos-GFP的驗證；

圖 3.3 T0代轉基因植株 PCR 檢測A：T0代 CRISPR/Cas9 轉基因植株 PCR 檢測；B：T0代過表達載體轉基因植株 PCR 檢測；C：T0代干擾載體轉基因植株 PCR 檢測；M：DL2000Marker；P：陽性對照；N：陰性對照；CK：非轉基因植株；1-5：轉基因植株；Fig.3.3 PCR detection of T0transgenic plantsA：T0generation CRISPR/Cas9 transgenic plants PCR detection；B：T0generation of expressionvector transgenic plants PCR detection.C：T0generation of interfering expression vector transgenicplants PCR detection.M：DL2000Marker；P：Positive control；N：Water；CK：Negative control；1-5：Positive plants；圖 3.4 T1代轉基因植株 PCR 檢測D：T1代 CRISPR/Cas9 轉基因植株 PCR 檢測；E：T1代過表達載體轉基因植株 PCR 檢測；F：T1代干擾載體轉基因植株 PCR 檢測；M：DL2000Marker；P：陽性對照；N：陰性對照；

果如圖 3.3-3.6 所示：圖 3.3 T0代轉基因植株 PCR 檢測A：T0代 CRISPR/Cas9 轉基因植株 PCR 檢測；B：T0代過表達載體轉基因植株 PCR 檢測；C：T0代干擾載體轉基因植株 PCR 檢測；M：DL2000Marker；P：陽性對照；N：陰性對照；CK：非轉基因植株；1-5：轉基因植株；Fig.3.3 PCR detection of T0transgenic plantsA：T0generation CRISPR/Cas9 transgenic plants PCR detection；B：T0generation of expressionvector transgenic plants PCR detection.C：T0generation of interfering expression vector transgenicplants PCR detection.M：DL2000Marker；P：Positive control；N：Water；CK：Negative control；1-5：Positive plants；


本文編號：2950635