SPGE技術(shù)優(yōu)化及在溪蓀花色調(diào)控相關(guān)基因表達(dá)研究中的應(yīng)用
發(fā)布時(shí)間：2020-12-30 01:36
本實(shí)驗(yàn)以溪蓀（Iris sanguinea）和白花溪蓀（Iris sanginea f.albiflora）為研究材料,首先對(duì)從國(guó)外引進(jìn)的用于mRNA直接提取的固相基因提取技術(shù)進(jìn)行研究?jī)?yōu)化;其次,根據(jù)溪蓀轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù),運(yùn)用RT-PCR方法從花瓣中分離出ANS、DFR、3GT基因,并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析;最后將優(yōu)化后的固相基因提取技術(shù)應(yīng)用到ANS、DFR、3GT基因表達(dá)特性分析中探究花色呈色調(diào)控相關(guān)機(jī)理,其研究主要成果如下:（1）優(yōu)選出價(jià)格便宜且操作更加簡(jiǎn)便快捷的國(guó)產(chǎn)探針（0.16*7mm,06Cr19Ni10）替代進(jìn)口探針（0.14*6mm,0Cr18Ni9）應(yīng)用于固相基因提取技術(shù),并發(fā)明了探針處理使用的新型玻璃瓶固定架（專(zhuān)利號(hào)為ZL201720392787.X）和新型探針?lè)胖眉埽▽?zhuān)利號(hào)為ZL201720192234.4）兩項(xiàng)實(shí)用新型專(zhuān)利,其優(yōu)化后的操作流程為:探針的預(yù)處理:依次用適量正丁烷、丙酮、乙醇分別清洗探針15min,80℃烘干箱烘干,之后加入固定比例的（3-糖氧丙基）三甲氧基硅烷、二甲苯、二異丙基乙胺混合液于80℃烘干箱孵化培養(yǎng)4h;探針的包埋:用適量乙酸乙酯清洗孵化培養(yǎng)后...
【文章來(lái)源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
圖２－１探針提取溪蓀ＲＮＡ??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｐｒｏｂｅ?ｅｘｔｒａｃｔｓ?ＲＮＡ?ｏｆ?Ｉ．?ｓａｎｇｕｉｎｅａ??
２．２．１不同規(guī)格探針對(duì)ＲＮＡ提取質(zhì)量的影響??２．２．１．１試驗(yàn)材料??固相基因提取技術(shù)優(yōu)化所選用的實(shí)驗(yàn)探針如圖２－２所示，分為０．２２＊５＿、??０．１６＊７ｍｍ、０．１４＊６ｍｍ、０．２５＊１３ｍｍ?四種規(guī)格，２?號(hào)為進(jìn)口針，材質(zhì)為?０Ｃｒｌ８Ｎｉ９，其余??三種為國(guó)產(chǎn)針，材質(zhì)為〇６Ｃｒｌ９ＮｉｌＯ。３號(hào)和４號(hào)探針可直接用手拿取，操作更加方便??快捷，而１號(hào)和２號(hào)探針則需要使用鑷子夾取探針，其余試驗(yàn)材料同２．１．１。??■｜ｎ??圖２－２不同規(guī)格的探針??Ｆｉｇｕｒｅ２－２?Ｐｒｏｂｅ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｓｐｅｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ??２．２．１．２試驗(yàn)方法??固相基因提取技術(shù)操作流程同２．１．２，其中預(yù)處理操作中探針?lè)趸囵B(yǎng)時(shí)間為１２ｈ，??－１２－??
１０Ｏｂｐ?Ｕ＿??圖２－７不同濃度Ｏｌｉｇｏ?ｄｔ２５對(duì)ＲＮＡ提取質(zhì)量的影響??Ｆｉｇｕｒｅ?２－７?Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ?ｏｆ?Ｏｌｉｇｏ?ｄｔ２５?ｏｎ?ｔｈｅ?ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ?ｑｕａｌｉｔｙ?ｏｆ?ＲＮＡ??Ｍ：?ＤＮＡ?標(biāo)準(zhǔn)分子量；ＣＫ：陰性對(duì)照；１：?ｌｎＭ０１ｉｇｏｄｔ２５，ＰＣＲ產(chǎn)物；２：?３ｎＭ０１ｉｇｏｄｔ２５，??ＰＣＲ?產(chǎn)物；３：?５ｎＭ０１ｉｇｏｄｔ２５，?ＰＣＲ?產(chǎn)物．??Ｍ：?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ?２０００；?ＣＫ：?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ；?１：?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?１?｜＾Ｍ?Ｏｌｉｇｏ?ｄｔ２５；?２：?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?３｜ｉＭ??Ｏｌｉｇｏ?ｄｔ２５；?３?：?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?５｜ｘＭ?Ｏｌｉｇｏ?ｄｔ２５．??２．３．６貯存條件及時(shí)間優(yōu)化??將優(yōu)化處理后的探針置于干凈的ＰＣＲ管中，并置于封口袋中抽真空密封保存至４°Ｃ??冰箱中，分別于０ｄ、７ｄ、１４ｄ、２１ｄ、２８ｄ后取出提取溪蓀葉片ＲＮＡ，以此為模板反轉(zhuǎn)??錄成ｃＤＮＡ?—條鏈，經(jīng)ＰＣＲ擴(kuò)增后的產(chǎn)物，１％瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果如圖２－８所示，條??帶１?（０ｄ）、２?（７ｄ）、３?（１４ｄ）亮度基本一致，條帶４?（２１ｄ）亮度略有降低，條帶５??（２８ｄ）
本文編號(hào)：2946719
【文章來(lái)源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校
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【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
圖２－１探針提取溪蓀ＲＮＡ??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｐｒｏｂｅ?ｅｘｔｒａｃｔｓ?ＲＮＡ?ｏｆ?Ｉ．?ｓａｎｇｕｉｎｅａ??
２．２．１不同規(guī)格探針對(duì)ＲＮＡ提取質(zhì)量的影響??２．２．１．１試驗(yàn)材料??固相基因提取技術(shù)優(yōu)化所選用的實(shí)驗(yàn)探針如圖２－２所示，分為０．２２＊５＿、??０．１６＊７ｍｍ、０．１４＊６ｍｍ、０．２５＊１３ｍｍ?四種規(guī)格，２?號(hào)為進(jìn)口針，材質(zhì)為?０Ｃｒｌ８Ｎｉ９，其余??三種為國(guó)產(chǎn)針，材質(zhì)為〇６Ｃｒｌ９ＮｉｌＯ。３號(hào)和４號(hào)探針可直接用手拿取，操作更加方便??快捷，而１號(hào)和２號(hào)探針則需要使用鑷子夾取探針，其余試驗(yàn)材料同２．１．１。??■｜ｎ??圖２－２不同規(guī)格的探針??Ｆｉｇｕｒｅ２－２?Ｐｒｏｂｅ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｓｐｅｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ??２．２．１．２試驗(yàn)方法??固相基因提取技術(shù)操作流程同２．１．２，其中預(yù)處理操作中探針?lè)趸囵B(yǎng)時(shí)間為１２ｈ，??－１２－??
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