發(fā)布時間：2020-12-24 05:37

　　CRISPR（clustered regulatory interspersed short palindromic repeat）/Cas9（CRISPR associated proteins）是源于原核生物的一種獲得性免疫系統(tǒng),廣泛應(yīng)用于細(xì)菌、真菌、動物和植物的基因編輯研究中。本研究是以轉(zhuǎn)基因本氏煙草16C（16C transgenic Nicotiana benthamiana,16C-NB）為材料,利用CRISPR/Cas9技術(shù)實現(xiàn)對其GFP（green fluorescent protein）基因的編輯工作,使用PCR-RE（polymerase chain reaction-restriction enzyme）的方法檢測了突變體,建立了本氏煙草CRISPR/Cas9基因敲除瞬時表達(dá)系統(tǒng),進(jìn)而探討了CRISPR/Cas9系統(tǒng)在植物基因敲除中的應(yīng)用。在本研究中,采用In-Fusion克隆技術(shù)獲得了操作性強(qiáng)的中間載體,針對靶基因GFP設(shè)計特定靶位點并進(jìn)行了基因突變實驗,為將來開展其它植物內(nèi)源基因的生物學(xué)功能研究提供了參考。 

【文章來源】：分子植物育種. 2017年01期 北大核心

【文章頁數(shù)】：9 頁

【文章目錄】：
1 結(jié)果與分析
    1.1 通過In-Fusion技術(shù)改造psg R-Cas9-At載體
    1.2 GFP基因的克隆
    1.3 預(yù)測靶位點
    1.4 GFP基因CRISPR/Cas9編輯載體的構(gòu)建
    1.5 重組子亞克隆到p Cambia 1300-nluc植物雙元表達(dá)載體
    1.6 轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌并侵染本氏煙草
    1.7 GFP基因編輯效率的檢測
2 討論
3 材料與方法
    3.1 材料
    3.2 GFP基因的克隆
    3.3 GFP基因在p GEM-Tesay載體中的克隆
    3.4 靶標(biāo)位點的確定
    3.5 In-Fusion克隆技術(shù)改造psg R-Cas9-At載體
    3.6 GFP guide序列在psg R-Cas9-IF-At載體中的克隆
    3.7 構(gòu)建植物表達(dá)載體
    3.8 轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌及侵染本氏煙草
    3.9 編輯效率的檢測
作者貢獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Targeted Mutagenesis in Zea mays Using TALENs and the CRISPR/Cas System[J]. Zhen Liang,Kang Zhang,Kunling Chen,Caixia Gao.  Journal of Genetics and Genomics. 2014(02)



本文編號：2935086