CRISPR（clustered regulatory interspersed short palindromic repeat）/Cas9（CRISPR associated proteins）是源于原核生物的一種獲得性免疫系統(tǒng),廣泛應用于細菌、真菌、動物和植物的基因編輯研究中。本研究是以轉基因本氏煙草16C（16C transgenic Nicotiana benthamiana,16C-NB）為材料,利用CRISPR/Cas9技術實現(xiàn)對其GFP（green fluorescent protein）基因的編輯工作,使用PCR-RE（polymerase chain reaction-restriction enzyme）的方法檢測了突變體,建立了本氏煙草CRISPR/Cas9基因敲除瞬時表達系統(tǒng),進而探討了CRISPR/Cas9系統(tǒng)在植物基因敲除中的應用。在本研究中,采用In-Fusion克隆技術獲得了操作性強的中間載體,針對靶基因GFP設計特定靶位點并進行了基因突變實驗,為將來開展其它植物內源基因的生物學功能研究提供了參考。 

【文章來源】：分子植物育種. 2017年01期 北大核心

【文章頁數(shù)】：9 頁

【文章目錄】：
1 結果與分析
    1.1 通過In-Fusion技術改造psg R-Cas9-At載體
    1.2 GFP基因的克隆
    1.3 預測靶位點
    1.4 GFP基因CRISPR/Cas9編輯載體的構建
    1.5 重組子亞克隆到p Cambia 1300-nluc植物雙元表達載體
    1.6 轉化農桿菌并侵染本氏煙草
    1.7 GFP基因編輯效率的檢測
2 討論
3 材料與方法
    3.1 材料
    3.2 GFP基因的克隆
    3.3 GFP基因在p GEM-Tesay載體中的克隆
    3.4 靶標位點的確定
    3.5 In-Fusion克隆技術改造psg R-Cas9-At載體
    3.6 GFP guide序列在psg R-Cas9-IF-At載體中的克隆
    3.7 構建植物表達載體
    3.8 轉化農桿菌及侵染本氏煙草
    3.9 編輯效率的檢測
作者貢獻


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Targeted Mutagenesis in Zea mays Using TALENs and the CRISPR/Cas System[J]. Zhen Liang,Kang Zhang,Kunling Chen,Caixia Gao.  Journal of Genetics and Genomics. 2014(02)



本文編號：2935086