目的淀粉樣前體蛋白APP是一個(gè)多功能的跨膜蛋白,能夠促進(jìn)神經(jīng)元的分化和突觸的形成。在病理情況下,淀粉樣前體蛋白的異常水解可形成一種由42個(gè)氨基酸組成的淀粉樣多肽片段,該片段的沉積可對(duì)神經(jīng)元產(chǎn)生不可逆的損害作用并導(dǎo)致記憶力下降,因此也被認(rèn)為是引起阿爾茨海默病的一個(gè)重要的假說。阿爾茨海默病是一種常見的神經(jīng)退行性疾病。環(huán)磷腺苷效應(yīng)元件結(jié)合蛋白CREB是重要的核轉(zhuǎn)錄因子。有研究發(fā)現(xiàn),AD患者大腦中CREB含量下降,APP蛋白含量明顯上升,然而CREB對(duì)APP的調(diào)控作用還不清楚。因此我們利用了CRISPR/Cas9技術(shù)將小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞系（HT22細(xì)胞系）中CREB基因敲除,進(jìn)一步探討CREB對(duì)于APP的表達(dá)調(diào)控作用,并探討其具體作用機(jī)制。方法1.構(gòu)建pX459-CREB質(zhì)粒;將設(shè)計(jì)好的三組sgRNA插入到pX459質(zhì)粒當(dāng)中;2.驗(yàn)證pX459-CREB質(zhì)粒的活性;將構(gòu)建好的pX459-CREB-1/2/3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進(jìn)HT22細(xì)胞中,提取全基因組DNA進(jìn)行檢測,利用短鏈PCR測序法和T7E1酶切法驗(yàn)證構(gòu)建質(zhì)粒的活性;3.利用pX459-CREB質(zhì)粒構(gòu)建CREB基因敲除的HT22細(xì)胞系,進(jìn)行Wes... 

【文章來源】：寧夏醫(yī)科大學(xué)寧夏回族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

TA克隆分析檢測Indel突變Fig.4TAcloninganalysistoidentifyIndelmutations

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]細(xì)胞周期調(diào)控的研究[J]. 吳爽,謝明宏,安娜.  科學(xué)技術(shù)創(chuàng)新. 2018(01)



本文編號(hào)：2932635