萜類(lèi)化合物在植物代謝產(chǎn)物中種類(lèi)繁多,除了在植物生長(zhǎng)、發(fā)育、殺蟲(chóng)、避食、防御等方面有著重要的生理和生態(tài)作用外,大多成分還具有應(yīng)用價(jià)值。近年來(lái)人們的研究重點(diǎn)逐漸轉(zhuǎn)移到對(duì)其生物合成途徑中關(guān)鍵酶的研究。關(guān)鍵酶一般位于合成途徑的分支處,催化各種中間體以及后續(xù)產(chǎn)物的合成。有效調(diào)控某些關(guān)鍵酶的合成與表達(dá),可以相應(yīng)提高有關(guān)萜類(lèi)化合物的產(chǎn)量。本實(shí)驗(yàn)主要對(duì)萜類(lèi)合成途徑中關(guān)鍵酶基因DXS和FPS進(jìn)行克隆及生物信息學(xué)分析,構(gòu)建p BI121-DXS、p BI121-FPS和p BI121-DXS-FPS過(guò)表達(dá)載體,通過(guò)煙草遺傳轉(zhuǎn)化進(jìn)行基因表達(dá)和茄尼醇含量分析,探討茄尼醇代謝的調(diào)控機(jī)制。主要獲得以下研究結(jié)果:1.首次從普通煙草K326中克隆得到1-脫氧-木酮糖-5-磷酸合成酶（DXS）的完整編碼區(qū)序列,長(zhǎng)2142 bp,并較全面地對(duì)DXS基因與蛋白序列進(jìn)行了生物信息學(xué)分析,結(jié)果表明其與枸杞、馬鈴薯、番茄、辣椒等的一致性在85%以上;該酶屬于親水性蛋白,沒(méi)有信號(hào)肽及跨膜結(jié)構(gòu)域,預(yù)測(cè)其具有葉綠體轉(zhuǎn)運(yùn)肽并定位于葉綠體,含有保守結(jié)構(gòu)域TPP_synthase_N、TPP_... 

【文章來(lái)源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：105 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第一章 煙草萜類(lèi)化合物代謝的研究進(jìn)展
    1.1 植物中的萜類(lèi)化合物
    1.2 類(lèi)萜類(lèi)生物合成途徑的研究進(jìn)展
    1.3 類(lèi)萜類(lèi)合成途徑中關(guān)鍵酶DXS和FPS的研究進(jìn)展
        1.3.1 DXS酶的研究進(jìn)展
        1.3.2 FPS酶的研究進(jìn)展
    1.4 茄尼醇的研究
        1.4.1 茄尼醇分離、提取及含量檢測(cè)的研究進(jìn)展
        1.4.2 茄尼醇生物代謝途徑及關(guān)鍵酶的研究
    1.5 研究目的及意義
    1.6 研究?jī)?nèi)容
    1.7 技術(shù)路線
第二章 煙草K326 DXS、FPS基因的克隆及表達(dá)模式分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 煙草K326 DXS基因的克隆及生物信息學(xué)分析
        2.2.2 煙草K326 FPS基因的克隆及生物信息學(xué)分析
        2.2.3 DXS、FPS基因 3’RACE克隆
        2.2.4 DXS、FPS基因的表達(dá)模式分析
    2.3 討論
第三章 植物表達(dá)載體的構(gòu)建
    3.1 材料與方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 植物表達(dá)載體PBI121-DXS、PBI121-FPS的構(gòu)建
        3.2.2 植物表達(dá)載體PBI121-DXS-FPS的構(gòu)建
    3.3 討論
第四章 煙草轉(zhuǎn)化及茄尼醇含量分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
        4.2.2 轉(zhuǎn)基因煙草
        4.2.3 轉(zhuǎn)基因煙草的PCR檢測(cè)
        4.2.4 轉(zhuǎn)基因煙草的DXS、FPS Real-Time PCR結(jié)果分析
        4.2.5 茄尼醇含量檢測(cè)分析
    4.3 討論
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷、在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果
附錄



本文編號(hào)：2930886