文心蘭（Oncidesa）是蘭科（Orchidaceae）文心蘭屬植物,是世界上重要的盆花和鮮切花種類之一,具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。在鮮切花的生產(chǎn)和運(yùn)輸中造成的機(jī)械損傷而產(chǎn)生的乙烯易使其花瓣衰老較快。這是制約其更廣泛的應(yīng)用的一大因素,至今只能通過一些藥劑等手段暫緩其花瓣的衰老,還未從源頭上得到解決,因此選育乙烯不敏感型的文心蘭品種是文心蘭育種的一大重要方向。乙烯不敏感蛋白（ethylene-insensitive 2,EIN2）作為乙烯信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中的關(guān)鍵樞紐,對乙烯反應(yīng)機(jī)制的完成有著重要影響。現(xiàn)已證實(shí)EIN2基因突變時(shí)可以實(shí)現(xiàn)乙烯不敏感,阻斷乙烯信號的傳導(dǎo)過程,從而使乙烯反應(yīng)不能完成。本研究以文心蘭’南茜’為材料,利用蘭花轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),通過RT-PCR以及RACE技術(shù)克隆獲得EIN2基因,并通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR以及轉(zhuǎn)化文心蘭原球莖、愈傷組織、原生質(zhì)體的研究,對該基因進(jìn)行初步的功能驗(yàn)證。本文研究的主要結(jié)果如下:1文心蘭OnEIN2基因的克隆與生物信息學(xué)分析本研究基于AtEIN2的核酸序列作為參考,與南茜轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對分析,獲得一條相似度較高的cDNA序列。設(shè)計(jì)引物利用RT-PCR結(jié)合... 

【文章來源】：福建農(nóng)林大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２?ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系統(tǒng)的作用機(jī)制?（２０１５瞿禮嘉［１８］）??Ｆｉ．?１－２?Ｔｈｅ?Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ?ｏｆ?ＣＲＩＳＰＲ?／?Ｃａｓ?Ｓｓｔｅｍ??

?文心蘭的基因特性與ＣＲ〖ＳＰＲ／Ｃａｓ９介導(dǎo)的基因編輯研究???列約為２６￣７２ｂｐ＿。間隔序列可對外源ＤＮＡ進(jìn)行識別，由Ｃａｓ基因編碼的高度??保守的核酸相關(guān)蛋白與ＣＲＩＳＰＲ轉(zhuǎn)錄出的ＲＮＡ結(jié)合成蛋白復(fù)合物，共同運(yùn)用??ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系統(tǒng)以防止外來遺傳物質(zhì)⑵】。??Ｓｐａｃｅｒｓ??

如種子的萌發(fā)、苗的生長、葉的伸展、花的開放和衰老以及果實(shí)成熟等［８２】；乙??烯合成后通過一系列的途徑誘導(dǎo)植物對乙烯的生物化學(xué)反應(yīng)。經(jīng)過多年的研宄，??目前已有一條近似線性的乙烯信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑（圖１＿３），在這個(gè)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑??中相關(guān)的基因有乙烯受體基因，銅離子轉(zhuǎn)運(yùn)基因，ＥＩＮ２，?ＥＩＮ３／ＥＩＬｓ，ＥＲＦ等；??乙烯受體在感受到乙烯信號后，通過下游的乙烯受體ＣＴＲ１，激活ＥＩＮ２，隨后??將信號傳到細(xì)胞核中的ＥＩＮ３／ＥＩＬＳ上再促進(jìn)轉(zhuǎn)錄因子ＥＲＦ的表達(dá)，從而完成一??系列的乙烯反應(yīng)【＊３］。??１０??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]乙烯和水楊酸信號轉(zhuǎn)導(dǎo)在擬南芥對聚乙二醇脅迫應(yīng)答中的相互作用[J]. 李光哲,李玲美,姚展鵬,柳福丹.  沈陽師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2017(02)
[2]香蕉CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)體系的建立[J]. 胡春華,鄧貴明,孫曉玄,左存武,李春雨,鄺瑞彬,楊喬松,易干軍.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(07)
[3]基于CRISPR/Cas9技術(shù)的月季TCP9基因轉(zhuǎn)化擬南芥[J]. 謝磊,王姍珊,胡博文,熊興耀,陳己任.  分子植物育種. 2017(03)
[4]水稻LOC_Os10g05490位點(diǎn)冷脅迫條件下表達(dá)分析及CRISPR/Cas9定向編輯[J]. 沈春修.  浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2017(02)
[5]文心蘭OnERS1全長基因克隆及表達(dá)分析[J]. 田曉巖,楊翠萍,胡進(jìn),閆冰玉,鞏笑笑,莊玉粉,潘英文,劉進(jìn)平.  分子植物育種. 2017(04)
[6]A detailed procedure for CRISPR/Cas9-mediated gene editing in Arabidopsis thaliana[J]. Wenshan Liu,Xiaohong Zhu,Mingguang Lei,Qingyou Xia,Jose Ramon Botella,Jian-Kang Zhu,Yanfei Mao.  Science Bulletin. 2015(15)
[7]文心蘭類原球莖的愈傷組織誘導(dǎo)及其植株再生[J]. 黃霞,盧禹.  廣西植物. 2016(09)
[8]PEG介導(dǎo)番木瓜葉肉原生質(zhì)體瞬時(shí)表達(dá)體系的建立[J]. 霍鵬,言普,沈文濤,周鵬.  分子植物育種. 2015(04)
[9]CRISPR/Cas9介導(dǎo)的基因編輯技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 李聰,曹文廣.  生物工程學(xué)報(bào). 2015(11)
[10]CRISPR-Cas9介導(dǎo)的基因組編輯技術(shù)的研究進(jìn)展[J]. 鄭小梅,張曉立,于建東,鄭平,孫際賓.  生物技術(shù)進(jìn)展. 2015(01)

博士論文
[1]基于CRISPR/Cas9的擬南芥多基因編輯及其在基因功能研究中的應(yīng)用[D]. 劉玟杉.重慶大學(xué) 2015
[2]CRISPR/Cas9基因定點(diǎn)突變體系構(gòu)建與大豆抗旱相關(guān)gma-miR160功能研究[D]. 孫現(xiàn)軍.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2015
[3]甜瓜果實(shí)發(fā)育相關(guān)基因的鑒定、表達(dá)特性及功能分析[D]. 高峰.內(nèi)蒙古大學(xué) 2013
[4]番茄中茉莉酸與其他激素信號的相互作用研究[D]. 賈承國.浙江大學(xué) 2009

碩士論文
[1]文心蘭離體培養(yǎng)優(yōu)化及轉(zhuǎn)化鐵氧還蛋白基因研究[D]. 吳曉佩.福建農(nóng)林大學(xué) 2017
[2]利用CRISPR/Cas9技術(shù)編輯甘藍(lán)基因的初步研究[D]. 馬存發(fā).西南大學(xué) 2017
[3]CRISPR/Cas9介導(dǎo)的大豆基因組定點(diǎn)編輯研究[D]. 蔡宇鵬.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2016
[4]文心蘭乙烯代謝相關(guān)基因克隆與表達(dá)及ACO功能驗(yàn)證[D]. 李玲.福建農(nóng)林大學(xué) 2014
[5]鐵棍山藥類原球莖誘導(dǎo)增殖及植株再生的研究[D]. 李紀(jì)強(qiáng).河南師范大學(xué) 2013
[6]轉(zhuǎn)基因蘭花培養(yǎng)物繼代保持及文心蘭ACO基因克隆與表達(dá)分析[D]. 林鶴延.福建農(nóng)林大學(xué) 2012
[7]根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)ACS反義基因轉(zhuǎn)化文心蘭的研究[D]. 金蘋.福建農(nóng)林大學(xué) 2009
[8]番茄LeEIN2基因的克隆及其功能研究[D]. 汪佳.重慶大學(xué) 2006



本文編號：2924181