神農(nóng)香菊（Chrysanthewum inicuum var.aromaticum）生長于湖北神農(nóng)架海拔2600米左右的地區(qū),全株具有香氣,含有多種化合物且具有抑菌的作用,是一種良好的精油提取及藥物加工的原材料,是我國獨有的珍貴花卉品種。其生存環(huán)境光照充足且強烈,易受低溫、高強度輻射等危害,從基因?qū)用嫜芯可褶r(nóng)香菊的生長發(fā)育和光合作用對改良神農(nóng)香菊觀賞特性及培育優(yōu)良的神農(nóng)香菊新品種具有十分重要的意義。bHLH轉(zhuǎn)錄因子對植物的生物進程以及逆境脅迫反應(yīng)起重要的調(diào)控作用,參與調(diào)控花形態(tài)建成、果實的形成及色素的合成,本研究探究了神農(nóng)香菊bHLH轉(zhuǎn)錄因子在其生長發(fā)育進程中的作用,通過轉(zhuǎn)基因方法使CibHLH1基因在模式植物煙草中過量表達,來研究CibHLH1基因的調(diào)控潛能。本研究以神農(nóng)香菊葉片RNA反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板,以bHLH-F/bHLH-R為特異性引物,通過PCR方法克隆得到神農(nóng)香菊bHLH轉(zhuǎn)錄因子基因,將其命名為CibHLH1基因,利用生物信息學(xué)方法對CibHLH1基因進行分析,結(jié)果表明,CibHLH1基因的ORF框長度為633bp,共編碼210個氨基酸,屬HLH超家族,調(diào)控參與基因的... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２?ｂＨＬＨ二聚體與ＤＮＡ相結(jié)合［４６］??

１．２．１植物ｂＨＬＨ轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)特點及分類??１．２．１．１?ｂＨＬＨ轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)特點??ｂＨＬＨ轉(zhuǎn)錄因子因具有高保守性的ｂＨＬＨ結(jié)構(gòu)域而得名［４Ｇ］（圖１－３），ｂＨＬＨ結(jié)構(gòu)??域由５０？６０個氨基酸構(gòu)成，其功能上是完全不同的兩個保守區(qū)域，即堿性氨基酸區(qū)域??（ｂａｓｉｃ?ｒｅｇｉｏｎ）和ａ螺旋１－環(huán)－ａ螺旋２區(qū)域（ＨＬＨ?ｒｅｇｉｏｎ）［氣堿性氨基酸區(qū)域大致??有１０？１５個堿性氨基酸且位于ｂＨＬＨ結(jié)構(gòu)域多肽鏈的Ｎ－端，這個區(qū)域主要與ＤＮＡ順??式元件?Ｅ－ｂｏｘ?（５＇－ＣＡＮＮＴＧ－３’）結(jié)合，最常用的為?Ｇ－Ｂｏｘ?（５＇－ＣＡＣＧＴＧ－３＇），進而調(diào)??控基因的轉(zhuǎn)錄［４１／ｔ４］，半數(shù)的植物ｂＨＬＨ都具有一個高度保守的ＨＥＲ元件（Ｈｉｓ５－Ｇｌｕ９??－Ａｒｇｌ３），以此來與ＤＮＡ結(jié)合［４３，４４］。ａ螺旋１－環(huán)－ａ螺旋２區(qū)位于Ｃ端，具有４０￣５０??個氨基酸，主要由疏水氨基酸殘基構(gòu)成，利于ＨＬＨ之間相互作用形成二聚體或異源二??聚體，進而與其他ｂＨＬＨ蛋白相互作用［２８］（圖１－２）。ｂＨＬＨ轉(zhuǎn)錄因子因其數(shù)量大，??種類多

以神農(nóng)香菊的ＲＮＡ反轉(zhuǎn)錄的ｃＤＮＡ為模板，以ｂＨＬＨ－Ｆ／ｂＨＬＨ－Ｒ為引物進行??ＰＣＲ擴増，ＰＣＲ產(chǎn)物經(jīng)濃度為１％瓊脂糖凝膠進行電泳檢測，檢測到一條約為７５０ｂｐ??的特異性擴增條帶如圖２－２。膠回收方法回收ＰＣＲ產(chǎn)物，將其與ｐＵＣ－Ｔ克隆載體連接??后轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)ＤＨ５ａ，抗性篩選出５個陽性克隆并通過ＰＣＲ擴增檢測如圖２－??３。??Ｍ??７５０?ｂｐ??圖２－２?Ｃ７Ｗ７Ｚ／廠基因ＰＣＲ結(jié)果??Ｆｉｇ．２－２?ＰＣＲ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＣｉｂＨＬＨｌ?ｇｅｎｅ??－１３－??

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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[3]調(diào)控紫杉醇合成轉(zhuǎn)錄因子TcMYC和TcWRKY1的克隆及功能研究[D]. 李書濤.華中科技大學(xué) 2012
[4]蘋果bHLH基因MdCIbHLH1克隆及功能分析[D]. 馮曉明.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011

碩士論文
[1]蘋果bHLH轉(zhuǎn)錄因子家族的鑒定及表達分析[D]. 楊金華.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2017
[2]香雪蘭類黃酮代謝相關(guān)bHLH轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆及其功能鑒定[D]. 單曉彤.東北師范大學(xué) 2016
[3]神農(nóng)香菊DiaMYB基因的表達特性及抗逆功能研究[D]. 劉穎竹.東北林業(yè)大學(xué) 2016
[4]UV-B輻射對神農(nóng)香菊腺毛及光合生理特性影響[D]. 焦宏彬.東北林業(yè)大學(xué) 2016
[5]水稻缺鐵響應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子OsIRO3與OsbHLH062功能的初步研究[D]. 王敏.浙江大學(xué) 2016
[6]神農(nóng)香菊DiaMYB基因克隆及功能分析[D]. 高耀輝.東北林業(yè)大學(xué) 2014



本文編號：2923997