油棕的果實(shí)含油量極高,占干重質(zhì)量可達(dá)90%,被譽(yù)為“世界油王”,長(zhǎng)鏈脂肪�；� CoA 合成酶（long chain long-chain acyl-CoA synthetase,LACS）將游離的脂肪酸活化,生成脂肪酰基CoA,進(jìn)而在高等植物的油脂合成和降解途徑中發(fā)揮重要的功能。在本研究中,我們成功從油棕中克隆到了油棕LACS蛋白家族中的基因EgLACS1和EgLACS9。這些克隆都包含一個(gè)高度保守AMP結(jié)合域,一個(gè)ACS信號(hào)基序和一個(gè)特殊的連接區(qū)域。進(jìn)化樹(shù)顯示,EgLACS1與AtLACS1,BnLACS1和AhLACS1屬于同一個(gè)分支,主要參與植物的超長(zhǎng)鏈脂肪酸（VLCFA）合成蠟和角質(zhì),這也說(shuō)明EgLACS1可能參與了油脂的合成。EgLACS9和AtLACS9,BnLACS9和GmLACS9等屬于同一個(gè)分支,主要參與質(zhì)體到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的轉(zhuǎn)運(yùn)。酵母互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)證明了EgLACS 和EgLACS9編碼的長(zhǎng)鏈脂肪�；o酶A合成酶能夠補(bǔ)償酵母YB525由于缺乏Faa1和Faa4編碼蛋白而失去的功能。淺藍(lán)菌素作用的條件下,在培養(yǎng)基中分別添加棕櫚酸（C16:0）、硬脂酸（C18:0）或油酸（C18:1... 

【文章來(lái)源】：海南大學(xué)海南省 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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圖３．１基因表達(dá)分析和克隆結(jié)果??Ｆｉｇ?３．１?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ａｎｄ?ｃｌｏｎｉｎｇ??

Ｖｌｏｘ和ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖ２ｏｘ和作為對(duì)照的含有空載的ＹＢ５２５菌株，并向培養(yǎng)基中??添加２５ｐｍ淺藍(lán)菌素抑制劑，和這三種不同的游離脂肪酸，在酵母細(xì)胞從０天到??４天的時(shí)間里，每隔２４ｈ，測(cè)定一次ＯＤ＿。如圖３．３Ｃ－Ｄ，?ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖｌｏｘ和??ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖ２ｏｘ的生長(zhǎng)速度明顯高于對(duì)照組，而ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖｌｏｘ和ＥｇＬＡＣＳｌ－??Ｖ２ｏｘ蛋白對(duì)游離脂肪酸Ｃｌ６，?Ｃｌ８柱和Ｃｌ?８的利用無(wú)顯著性差異。??３．１．４?ＥｇＬＡＣＳｌ對(duì)長(zhǎng)鏈脂肪酸熒光類(lèi)似物的吸收??為了進(jìn)一步確定ＥｇＬＡＣＳｌ在酵母中是否和Ｆａｔｌｐ?—起完成脂肪酸的轉(zhuǎn)運(yùn)，??我們向己經(jīng)被誘導(dǎo)的的酵母中添加５ｐＭ的脂肪酸熒光類(lèi)似物ＣＶＢＯＤＩＰＹ－Ｃｕ。??反應(yīng)后

Ａ．?ＹＢ５２５?ｈａｒｂｏｒｉｎｇ?ｅｍｐｔｙ?ｖｅｃｔｏｒ?Ｂ．?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖｌｏｘ??Ｃ．?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖ２ｏｘ?Ｄ．?Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ?ｏｆ?ｃｅｌｌｓ??此外也對(duì)熒光強(qiáng)度進(jìn)行了定量測(cè)量，如圖３．４?Ｄ，ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖｌｏｘ和??ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖ２ｏｘ菌體的熒光強(qiáng)度是ＹＢ５２５空載體的１．８和２倍，ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖｌｏｘ??和ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖ２〇Ｘ兩個(gè)過(guò)表達(dá)株之間沒(méi)有顯著性差異。??３．１．５?ＥｇＬＡＣＳｌ脂質(zhì)和脂肪酸含置??為了確定探討ＥｇＬＡＣＳｌ蛋白是否參與脂類(lèi)和脂肪酸的生物合成，對(duì)??ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖｌｏｘ和ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖ２ｏｘ和對(duì)照ＹＢ５２５?（ＥＶ）酵母用半乳糖誘導(dǎo)１８－??２０ｈ后，脂質(zhì)含量通過(guò)蘇丹黑Ｂ染色法測(cè)量。如圖３．５?Ａ，與對(duì)照組相比，ＥｇＬＡＣＳ?１?－??Ｖ１?ｏｘ和ＥｇＬＡＣＳ?１?－Ｖ２ｏｘ脂質(zhì)含量的增加。??２２??


本文編號(hào)：2921025