本文從長清團山采集的富含植物纖維的腐土樣中,利用阿魏酸乙酯平板法—透明圈法對土樣中產阿魏酸酯酶的菌株進行了篩選,結果得到7株有透明圈的菌株,其中1株的透明圈復篩的水解圈顯著,將其命名為QU108。菌株QU108的菌落表面凹凸不平,有放射狀皺褶,菌絲初期為白色,隨培養(yǎng)時間的延長顏色逐漸加深,最后為黑色,顯微鏡下觀察到孢子梗著生的分生孢子≤3個,孢子彎曲如新月,被隔膜隔成3隔室。PCR擴增了該菌的18S rDNA基因,產物大小為1638bp,Blast同源分析顯示和Cochliobolus sp.的同一性高達99%,初步判定菌株QU108屬于彎孢菌屬。根據通用引物擴增了菌株QU108的ITS序列,其長度為336bp,同源比對結果顯示和Cochliobolus lunatus的同一性高達到100%。根據形態(tài)學觀察和分子生物學鑒定,可以確定所分離的菌株屬真菌界、真菌門、叢梗孢目、叢梗孢科、旋孢腔菌屬的谷子彎孢菌。以黑曲霉阿魏酸酯酶A的蛋白序列為目標序列,在谷子彎孢菌全基因組序列中通過BlastP比對獲得其阿魏酸酯酶A的基因候選序列。采用PCR技術克隆得到谷子彎孢菌QU108的阿魏酸酯酶A的基因... 

【文章來源】：齊魯工業(yè)大學山東省

【文章頁數】：58 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 阿魏酸酯酶
    1.2 阿魏酸酯酶的分類和來源
    1.3 阿魏酸酯酶的生產
        1.3.1 固體發(fā)酵生產阿魏酸酯酶
        1.3.2 阿魏酸酯酶的分子克隆
    1.4 阿魏酸酯酶的應用
        1.4.1 植物生物質的預處理
        1.4.2 阿魏酸酯酶在羥基肉桂酸釋放中的應用
        1.4.3 阿魏酸酯酶在生物質加工中的應用
        1.4.4 阿魏酸及其相關精細化學品的生產應用
        1.4.5 阿魏酸酯酶制漿造紙工業(yè)的應用
        1.4.6 阿魏酸酯酶在飼料工業(yè)中的應用
        1.4.7 阿魏酸酯酶在調味料和酒精飲料工業(yè)的應用
    1.5 本論文的研究目的及內容
第2章 產阿魏酸酯酶谷子彎孢菌的分離及鑒定
    2.1 材料和方法
        2.1.1 試驗材料
        2.1.2 試驗方法
    2.2 實驗結果與分析
        2.2.1 分離產阿魏酸酯酶的絲狀真菌
        2.2.2 產阿魏酸酯酶菌株QU108的形態(tài)觀察
        2.2.3 產阿魏酸酯酶菌株QU108的分子鑒定
    2.3 本章小結
第3章 谷子彎孢菌阿魏酸酯酶A基因的分離及生物信息學分析
    3.1 試驗材料
        3.1.1 菌種與質粒
        3.1.2 培養(yǎng)基及相關試劑
        3.1.3 主要儀器
    3.2 試驗方法
        3.2.1 谷子彎孢菌QU108染色體DNA的提取
        3.2.2 谷子彎孢菌QU108阿魏酸酯酶A基因序列檢索
        3.2.3 谷子彎孢菌QU108阿魏酸酯酶A基因的PCR擴增
        3.2.4 谷子彎孢菌faeA的PCR產物回收
        3.2.5 谷子彎孢菌faeA的PCR產物和T載體重組連接
        3.2.6 谷子彎孢菌faeA的DNA序列測定
        3.2.7 谷子彎孢菌阿魏酸酯酶基因和蛋白質的生物信息學分析
    3.3 試驗結果與分析
        3.3.1 谷子彎孢菌QU108菌株染色體DNA的提取
        3.3.2 谷子彎孢菌QU108阿魏酸酯酶A基因的克隆
        3.3.3 谷子彎孢菌QU108阿魏酸酯酶A生物信息學分析
    3.4 本章小結
第4章 谷子彎孢菌QU108阿魏酸酯酶基因在畢赤酵母中的表達
    4.1 試驗材料
        4.1.1 菌株
        4.1.2 培養(yǎng)基及相關溶液
        4.1.3 工具酶和試劑
        4.1.4 主要儀器
    4.2 試驗方法
        4.2.1 谷子彎孢菌QU108阿魏酸酯酶A cDNA基因的克隆
        4.2.2 谷子彎孢菌QU108阿魏酸酯酶A表達載體pPIC9k-ClfaeA的構建
        4.2.3重組質粒pPIC9k-ClfaeA轉化畢赤酵母GS115
        4.2.4 重組畢赤酵母轉化子的篩選
        4.2.5 阿魏酸酯酶活性測定方法
        4.2.6 畢赤酵母轉化子發(fā)酵液的SDS-PAGE分析
        4.2.7 重組阿魏酸酯酶A酶學性質測定
    4.3 試驗結果與分析
        4.3.1 表達載體pPIC9K-ClfaeA的構建及線性化
        4.3.2 載體pPIC9K-ClfaeA電轉化畢赤酵母
        4.3.3 畢赤酵母faeA活性轉化子的篩選
        4.3.4 畢赤酵母轉化子發(fā)酵液上清的SDS-PAGE分析
        4.3.5 溫度對重組阿魏酸酯酶A的影響
        4.3.6 pH對重組阿魏酸酯酶A的影響
    4.4 本章小結
全文總結及展望
參考文獻
致謝



本文編號：2914268