本文從長清團(tuán)山采集的富含植物纖維的腐土樣中,利用阿魏酸乙酯平板法—透明圈法對(duì)土樣中產(chǎn)阿魏酸酯酶的菌株進(jìn)行了篩選,結(jié)果得到7株有透明圈的菌株,其中1株的透明圈復(fù)篩的水解圈顯著,將其命名為QU108。菌株QU108的菌落表面凹凸不平,有放射狀皺褶,菌絲初期為白色,隨培養(yǎng)時(shí)間的延長顏色逐漸加深,最后為黑色,顯微鏡下觀察到孢子梗著生的分生孢子≤3個(gè),孢子彎曲如新月,被隔膜隔成3隔室。PCR擴(kuò)增了該菌的18S rDNA基因,產(chǎn)物大小為1638bp,Blast同源分析顯示和Cochliobolus sp.的同一性高達(dá)99%,初步判定菌株QU108屬于彎孢菌屬。根據(jù)通用引物擴(kuò)增了菌株QU108的ITS序列,其長度為336bp,同源比對(duì)結(jié)果顯示和Cochliobolus lunatus的同一性高達(dá)到100%。根據(jù)形態(tài)學(xué)觀察和分子生物學(xué)鑒定,可以確定所分離的菌株屬真菌界、真菌門、叢梗孢目、叢梗孢科、旋孢腔菌屬的谷子彎孢菌。以黑曲霉阿魏酸酯酶A的蛋白序列為目標(biāo)序列,在谷子彎孢菌全基因組序列中通過BlastP比對(duì)獲得其阿魏酸酯酶A的基因候選序列。采用PCR技術(shù)克隆得到谷子彎孢菌QU108的阿魏酸酯酶A的基因... 

【文章來源】：齊魯工業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 阿魏酸酯酶
    1.2 阿魏酸酯酶的分類和來源
    1.3 阿魏酸酯酶的生產(chǎn)
        1.3.1 固體發(fā)酵生產(chǎn)阿魏酸酯酶
        1.3.2 阿魏酸酯酶的分子克隆
    1.4 阿魏酸酯酶的應(yīng)用
        1.4.1 植物生物質(zhì)的預(yù)處理
        1.4.2 阿魏酸酯酶在羥基肉桂酸釋放中的應(yīng)用
        1.4.3 阿魏酸酯酶在生物質(zhì)加工中的應(yīng)用
        1.4.4 阿魏酸及其相關(guān)精細(xì)化學(xué)品的生產(chǎn)應(yīng)用
        1.4.5 阿魏酸酯酶制漿造紙工業(yè)的應(yīng)用
        1.4.6 阿魏酸酯酶在飼料工業(yè)中的應(yīng)用
        1.4.7 阿魏酸酯酶在調(diào)味料和酒精飲料工業(yè)的應(yīng)用
    1.5 本論文的研究目的及內(nèi)容
第2章 產(chǎn)阿魏酸酯酶谷子彎孢菌的分離及鑒定
    2.1 材料和方法
        2.1.1 試驗(yàn)材料
        2.1.2 試驗(yàn)方法
    2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.2.1 分離產(chǎn)阿魏酸酯酶的絲狀真菌
        2.2.2 產(chǎn)阿魏酸酯酶菌株QU108的形態(tài)觀察
        2.2.3 產(chǎn)阿魏酸酯酶菌株QU108的分子鑒定
    2.3 本章小結(jié)
第3章 谷子彎孢菌阿魏酸酯酶A基因的分離及生物信息學(xué)分析
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 菌種與質(zhì)粒
        3.1.2 培養(yǎng)基及相關(guān)試劑
        3.1.3 主要儀器
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 谷子彎孢菌QU108染色體DNA的提取
        3.2.2 谷子彎孢菌QU108阿魏酸酯酶A基因序列檢索
        3.2.3 谷子彎孢菌QU108阿魏酸酯酶A基因的PCR擴(kuò)增
        3.2.4 谷子彎孢菌faeA的PCR產(chǎn)物回收
        3.2.5 谷子彎孢菌faeA的PCR產(chǎn)物和T載體重組連接
        3.2.6 谷子彎孢菌faeA的DNA序列測定
        3.2.7 谷子彎孢菌阿魏酸酯酶基因和蛋白質(zhì)的生物信息學(xué)分析
    3.3 試驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.3.1 谷子彎孢菌QU108菌株染色體DNA的提取
        3.3.2 谷子彎孢菌QU108阿魏酸酯酶A基因的克隆
        3.3.3 谷子彎孢菌QU108阿魏酸酯酶A生物信息學(xué)分析
    3.4 本章小結(jié)
第4章 谷子彎孢菌QU108阿魏酸酯酶基因在畢赤酵母中的表達(dá)
    4.1 試驗(yàn)材料
        4.1.1 菌株
        4.1.2 培養(yǎng)基及相關(guān)溶液
        4.1.3 工具酶和試劑
        4.1.4 主要儀器
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 谷子彎孢菌QU108阿魏酸酯酶A cDNA基因的克隆
        4.2.2 谷子彎孢菌QU108阿魏酸酯酶A表達(dá)載體pPIC9k-ClfaeA的構(gòu)建
        4.2.3重組質(zhì)粒pPIC9k-ClfaeA轉(zhuǎn)化畢赤酵母GS115
        4.2.4 重組畢赤酵母轉(zhuǎn)化子的篩選
        4.2.5 阿魏酸酯酶活性測定方法
        4.2.6 畢赤酵母轉(zhuǎn)化子發(fā)酵液的SDS-PAGE分析
        4.2.7 重組阿魏酸酯酶A酶學(xué)性質(zhì)測定
    4.3 試驗(yàn)結(jié)果與分析
        4.3.1 表達(dá)載體pPIC9K-ClfaeA的構(gòu)建及線性化
        4.3.2 載體pPIC9K-ClfaeA電轉(zhuǎn)化畢赤酵母
        4.3.3 畢赤酵母faeA活性轉(zhuǎn)化子的篩選
        4.3.4 畢赤酵母轉(zhuǎn)化子發(fā)酵液上清的SDS-PAGE分析
        4.3.5 溫度對(duì)重組阿魏酸酯酶A的影響
        4.3.6 pH對(duì)重組阿魏酸酯酶A的影響
    4.4 本章小結(jié)
全文總結(jié)及展望
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：2914268