甘蔗（Saccharur2 spp.）是全球生產(chǎn)蔗糖的主要原料,也是已知人類馴化生物量最高的C4作物,富含纖維素等碳水化合物,是理想的生產(chǎn)生物燃料的能源作物。纖維素合成酶是植物纖維素合成所必需的關鍵酶,因此研究纖維素合成酶的分子遺傳機制和基因功能具有重要理論意義和應用價值。本研究通過比較基因組學手段,并應用單子葉模式植物擬南芥和雙子葉模式植物水稻轉(zhuǎn)化系統(tǒng),結(jié)合纖維素表型分析技術(shù)研究了甘蔗初生細胞壁和次生細胞壁合成相關基因SsCesA3、SsCesA9和SsCesA11d的功能。主要結(jié)果如下:（1）利用基因組學手段,預測甘蔗割手密纖維素合成酶A家族共有11個成員,并利用單子葉植物水稻、玉米、高粱、甘蔗,雙子葉植物擬南芥、葡萄這六種植物纖維素合成酶A基因蛋白質(zhì)序列構(gòu)建進化樹,結(jié)合SsCesAs在不同時期不同組織的表達譜數(shù)據(jù),預測其中與初生細胞壁合成相關的基因是SsCesA3和SsCesA9,與次生細胞壁合成相關的基因是SsCesA11。（2）初步摸索甘蔗割手密組織培養(yǎng)條件,通過調(diào)節(jié)類生長素2,4-D濃度,促進了愈傷的脫分化,通過添加PVP（聚乙烯吡咯烷酮）有效遏制了愈傷褐化,在完善長芽培養(yǎng)... 

【文章來源】：福建農(nóng)林大學福建省

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２甘蔗纖維素合酶Ａ家族基因基因組結(jié)構(gòu)圖??Ｆｉｇ．?１－２?Ｔｈｅ?ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｅｘｏｎｓ?ａｎｄ?ｉｎｔｒｏｎｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＳｓＣｅｓＡ?ｇｅｎｅ??

組位點和重組酶進行ＬＲ反應，高效、快速地將目的片段連接到目的載體（Ｄｅｓｔｉｎａｔｉｏｎ??Ｖｅｃｔｏｒ）中并替換掉致死基因ｃｃｄＢ。Ｇａｔｅｗａｙ其ＢＰ反應與ＬＲ反應簡易反應示意圖??如下圖２－１：??ｃｃｄＢ??ｏｔｔＢｌ?ａｔｔＢ２?ａｔｔＰｌ?＾＾＾＾ａｔｔＰ２??Ｍ?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?＼?ｉ?Ｄｏｎｏｒ?＼??Ｉ?Ｃｌｏｎｅ?１?＋?１?Ｖｅｃｔｏｒ?１??％?（Ａｍｐ＊）?＃?１?（Ｋａｎ＊）?Ｍ??牛??ＢＰ?Ｃｌｏｎａｓｅ＊?ＬＲ?Ｃｌｏｎａｓｅ＊??（Ｉｎｔ?＋?ＩＨＦ）?（Ｉｎｔ?＋?ＩＨＦ?？?Ｘｌｓ）??＋??ｃｃｄＢ??ｏｔｔＬｌ?ａｔｔＬ２?ａｔｔＲｌ?．?ａｔｔＲ２??Ｍ?Ｅｎｔｒｙ?＼?ｊＴ?Ｄｅｓｔｉｎａｔｉｏｎ?＼??Ｉ?Ｃｌｏｎｅ?１?＋?１?Ｖｅｃｔｏｒ?１??１?（Ｋａｎ＊）?Ｊ?＼?（Ａｍｐ－）?Ｊ??圖２－１?Ｇａｔｅｗａｙ反應示意圖??Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｈｅ?ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ？?Ｇａｔｅｗａｙ？??具體反應體系及條件如下：??（１）?ＢＰ反應體系及條件見下表２－４：??表２－４ＢＰ反應體系（５｜ｉＬ）???Ｔａｂｌｅ?２－４?Ｔｈｅ?ｒｅａｃｔｉｏｎ?ｓｙｓｔｅｍ?ｏｆ?ＢＰ?（５｜ｉＬ）??試劑名稱?使用量（ＨＬ）??ＴＥ?Ｂｕｆｆｅｒ?１??ＢＰ?Ｃｌｏｎａｓｅ？?ＩＩ?１??目的片段?１．５??ｐＤＯＮＲ２０７?（Ｅｎｔｒｙ?Ｖｅｃｔｏｒ）?１．５??上訴混合體系

?ｈ１１??，、ｊ?ｍＲｒ?：?；?Ｊ３??圖２－３甘蔗割手密愈傷誘導生芽過程??Ｆｉｇ．?２－３?Ｔｈｅ?ｐｒｏｇｒｅｓｓ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ?ｉｎｔｏ?ｂｕｄ??（注：ａ為誘導生芽階段初期，ｂ為誘導生芽階段后期）??待完全分化出芽后，將愈傷塊轉(zhuǎn)接至生根培養(yǎng)基中２－３周，如圖２－４，結(jié)果逐漸??分化出白色細長的根器官，取出分離后即可形成一株株獨立小苗。??＿＿??圖２－４甘蔗割手密愈傷誘導生根過程??Ｆｉｇ．?２－４?Ｔｈｅ?ｐｒｏｇｒｅｓｓ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ?ｉｎｔｏ?ｒｏｏｔ??（注：ａ為誘導生根階段初期，ｂ為誘導生根階段后期）??３．３啟動子的克隆??根據(jù)以ＢＡＣ文庫中所得的Ｃｅｄ基因家族三個成員的基因組序列為模板，設計??甘蔗啟動子引物，因為是以Ｇａｔｅｗａｙ法構(gòu)建載體，在引物上下游５’分別添加靶頭序??列，以提取割手密ＳＥＳ－２０８葉片ＤＮＡ為模板，成功克隆到??２５??

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]甘蔗纖維素合酶基因超家族的基因組演化及其A家族基因的功能分析[D]. 池福鈴.福建師范大學 2015



本文編號：2901608