發(fā)布時(shí)間：2020-12-06 15:28

　　甘蔗（Saccharur2 spp.）是全球生產(chǎn)蔗糖的主要原料,也是已知人類馴化生物量最高的C4作物,富含纖維素等碳水化合物,是理想的生產(chǎn)生物燃料的能源作物。纖維素合成酶是植物纖維素合成所必需的關(guān)鍵酶,因此研究纖維素合成酶的分子遺傳機(jī)制和基因功能具有重要理論意義和應(yīng)用價(jià)值。本研究通過比較基因組學(xué)手段,并應(yīng)用單子葉模式植物擬南芥和雙子葉模式植物水稻轉(zhuǎn)化系統(tǒng),結(jié)合纖維素表型分析技術(shù)研究了甘蔗初生細(xì)胞壁和次生細(xì)胞壁合成相關(guān)基因SsCesA3、SsCesA9和SsCesA11d的功能。主要結(jié)果如下:（1）利用基因組學(xué)手段,預(yù)測甘蔗割手密纖維素合成酶A家族共有11個(gè)成員,并利用單子葉植物水稻、玉米、高粱、甘蔗,雙子葉植物擬南芥、葡萄這六種植物纖維素合成酶A基因蛋白質(zhì)序列構(gòu)建進(jìn)化樹,結(jié)合SsCesAs在不同時(shí)期不同組織的表達(dá)譜數(shù)據(jù),預(yù)測其中與初生細(xì)胞壁合成相關(guān)的基因是SsCesA3和SsCesA9,與次生細(xì)胞壁合成相關(guān)的基因是SsCesA11。（2）初步摸索甘蔗割手密組織培養(yǎng)條件,通過調(diào)節(jié)類生長素2,4-D濃度,促進(jìn)了愈傷的脫分化,通過添加PVP（聚乙烯吡咯烷酮）有效遏制了愈傷褐化,在完善長芽培養(yǎng)... 

【文章來源】：福建農(nóng)林大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２甘蔗纖維素合酶Ａ家族基因基因組結(jié)構(gòu)圖??Ｆｉｇ．?１－２?Ｔｈｅ?ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｅｘｏｎｓ?ａｎｄ?ｉｎｔｒｏｎｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＳｓＣｅｓＡ?ｇｅｎｅ??

組位點(diǎn)和重組酶進(jìn)行ＬＲ反應(yīng)，高效、快速地將目的片段連接到目的載體（Ｄｅｓｔｉｎａｔｉｏｎ??Ｖｅｃｔｏｒ）中并替換掉致死基因ｃｃｄＢ。Ｇａｔｅｗａｙ其ＢＰ反應(yīng)與ＬＲ反應(yīng)簡易反應(yīng)示意圖??如下圖２－１：??ｃｃｄＢ??ｏｔｔＢｌ?ａｔｔＢ２?ａｔｔＰｌ?＾＾＾＾ａｔｔＰ２??Ｍ?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?＼?ｉ?Ｄｏｎｏｒ?＼??Ｉ?Ｃｌｏｎｅ?１?＋?１?Ｖｅｃｔｏｒ?１??％?（Ａｍｐ＊）?＃?１?（Ｋａｎ＊）?Ｍ??牛??ＢＰ?Ｃｌｏｎａｓｅ＊?ＬＲ?Ｃｌｏｎａｓｅ＊??（Ｉｎｔ?＋?ＩＨＦ）?（Ｉｎｔ?＋?ＩＨＦ?？?Ｘｌｓ）??＋??ｃｃｄＢ??ｏｔｔＬｌ?ａｔｔＬ２?ａｔｔＲｌ?．?ａｔｔＲ２??Ｍ?Ｅｎｔｒｙ?＼?ｊＴ?Ｄｅｓｔｉｎａｔｉｏｎ?＼??Ｉ?Ｃｌｏｎｅ?１?＋?１?Ｖｅｃｔｏｒ?１??１?（Ｋａｎ＊）?Ｊ?＼?（Ａｍｐ－）?Ｊ??圖２－１?Ｇａｔｅｗａｙ反應(yīng)示意圖??Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｈｅ?ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ？?Ｇａｔｅｗａｙ？??具體反應(yīng)體系及條件如下：??（１）?ＢＰ反應(yīng)體系及條件見下表２－４：??表２－４ＢＰ反應(yīng)體系（５｜ｉＬ）???Ｔａｂｌｅ?２－４?Ｔｈｅ?ｒｅａｃｔｉｏｎ?ｓｙｓｔｅｍ?ｏｆ?ＢＰ?（５｜ｉＬ）??試劑名稱?使用量（ＨＬ）??ＴＥ?Ｂｕｆｆｅｒ?１??ＢＰ?Ｃｌｏｎａｓｅ？?ＩＩ?１??目的片段?１．５??ｐＤＯＮＲ２０７?（Ｅｎｔｒｙ?Ｖｅｃｔｏｒ）?１．５??上訴混合體系

?ｈ１１??，、ｊ?ｍＲｒ?：?；?Ｊ３??圖２－３甘蔗割手密愈傷誘導(dǎo)生芽過程??Ｆｉｇ．?２－３?Ｔｈｅ?ｐｒｏｇｒｅｓｓ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ?ｉｎｔｏ?ｂｕｄ??（注：ａ為誘導(dǎo)生芽階段初期，ｂ為誘導(dǎo)生芽階段后期）??待完全分化出芽后，將愈傷塊轉(zhuǎn)接至生根培養(yǎng)基中２－３周，如圖２－４，結(jié)果逐漸??分化出白色細(xì)長的根器官，取出分離后即可形成一株株獨(dú)立小苗。??＿＿??圖２－４甘蔗割手密愈傷誘導(dǎo)生根過程??Ｆｉｇ．?２－４?Ｔｈｅ?ｐｒｏｇｒｅｓｓ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ?ｉｎｔｏ?ｒｏｏｔ??（注：ａ為誘導(dǎo)生根階段初期，ｂ為誘導(dǎo)生根階段后期）??３．３啟動子的克隆??根據(jù)以ＢＡＣ文庫中所得的Ｃｅｄ基因家族三個(gè)成員的基因組序列為模板，設(shè)計(jì)??甘蔗啟動子引物，因?yàn)槭且裕牵幔簦澹鳎幔?gòu)建載體，在引物上下游５’分別添加靶頭序??列，以提取割手密ＳＥＳ－２０８葉片ＤＮＡ為模板，成功克隆到??２５??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]甘蔗纖維素合酶基因超家族的基因組演化及其A家族基因的功能分析[D]. 池福鈴.福建師范大學(xué) 2015



本文編號：2901608