銅胺氧化酶是催化多胺降解的一個重要的酶,同時它也催化活性氧產(chǎn)生。前人藥理學和遺傳學研究顯示,銅胺氧化酶催化形成的活性氧參與了氣孔運動、維管發(fā)育等多種生理過程,暗示銅胺氧化酶在植物生長發(fā)育以及響應外界刺激過程中起著重要的作用。擬南芥銅胺氧化酶家族有10個基因,但是,目前只是對其中極個別的有少量研究,而關于大多數(shù)銅胺氧化酶基因的表達及其功能并不清楚。為了進一步研究銅胺氧化酶家族基因的功能,本論文系統(tǒng)分析了擬南芥銅胺氧化酶家族基因在不同器官以及不同發(fā)育階段的表達,同時分析了不同刺激對擬南芥氣孔保衛(wèi)細胞銅胺氧化酶家族基因表達的影響,結(jié)果如下:1.在12天齡幼苗中,CuAO1在根、下胚軸、葉中均有表達,但下胚軸和葉柄中的表達高于根和葉片,且在根、下胚軸、葉中維管組織的表達都高于周圍其它組織。在5周齡的生殖階段,CuAO1在花的萼片、花絲、柱頭和花瓣維管組織中有明顯表達。比較12天齡、3周齡和5周齡植株的根和葉中CuAOl的表達發(fā)現(xiàn),隨著擬南芥的發(fā)育,CuAO1在根和葉中的表達均呈上升趨勢,且維管組織中的表達量始終高于周圍組織。另外,在成熟的三周齡葉片中,CuAO1在葉片排水器及保衛(wèi)細胞中均表達,且暗和乙烯生物合成前體物質(zhì)1-氨基1-羧基環(huán)丙烷(ACC)處理能夠顯著誘導保衛(wèi)細胞中CuAO1的表達。2.在12天齡幼苗中,CuAO2在根、下胚軸、葉中均有表達,下胚軸中的表達高于根和葉,且各器官中維管組織的表達皆高于周圍組織。在生殖階段,CuA02在花的萼片、花絲、柱頭和花瓣維管組織中有明顯表達。隨著植物的發(fā)育,CuAO2在三周齡時根和葉中的表達均與12天齡時無明顯差異,但到5周齡時,CuA02在根和葉中的表達量均呈下降趨勢,但維管組織表達量仍高于周圍組織。另外,在成熟的三周齡葉片中,CuA02也在葉緣的排水器中表達,在保衛(wèi)細胞中不表達。但脫落酸(ABA)、ACC、水楊酸(SA)和暗處理均能極顯著誘導CuAO2在保衛(wèi)細胞中的表達。3.在12天齡幼苗中,CuAO3在根、下胚軸、葉中均有表達,但下胚軸和葉中的表達高于根;在根中,CuA03主要在根維管組織中表達,在周圍組織幾乎不表達;在下胚軸和葉中維管組織的表達均高于其它組織。在5周齡的生殖階段,CuAO3在花器官中不表達。隨著植物的發(fā)育,三周齡時,CuAO3在根中不表達,五周齡時,根中又開始表達,且在根維管組織中的表達高于周圍表皮和皮層組織。三周齡時,CuAO3在葉中的表達量下降,僅在維管組織和葉表皮保衛(wèi)細胞中表達,五周齡時,葉維管組織及周圍組織的表達量均重新上升。另外,在成熟的三周齡葉片中,CuAO3在排水器中不表達,在保衛(wèi)細胞中表達。ABA、ACC、SA和暗均能顯著誘導保衛(wèi)細胞中該基因的表達。4.在12天齡幼苗中,CuAO4在根、下胚軸、葉中均有表達,下胚軸和葉中的表達高于根,且在根、下胚軸、葉中維管組織的表達量都高于周圍其它組織。在花器官中,CuAO4僅在花絲、柱頭和萼片的維管組織中有微弱表達。隨著擬南芥的發(fā)育,CuAO4在根和葉中的表達均呈上升趨勢,且維管組織中的表達量始終高于周圍其它組織。在成熟的三周齡葉片中,CuAO4也在排水器中表達,在保衛(wèi)細胞中不表達。ABA、ACC、SA和暗等處理也均不能誘導保衛(wèi)細胞中CuAO4的表達。5.在12天齡幼苗中,CuAO5在根、下胚軸、葉中均有表達,下胚軸中的表達略高于根和葉,且各器官中維管組織的表達皆高于周圍組織。在花器官中,CuAO5僅在花的萼片及柱頭有較高表達。與12天齡幼苗相比,三周齡時CuAO5在根中的表達量上升,且在根尖的分生組織中的表達量顯著高于周圍組織,但到五周齡時,CuAO5在根中的表達量降低;在葉中,CuAO5的表達量隨著發(fā)育時間的延長明顯降低,三周齡和五周齡時,CuAO5只在葉緣的排水器和葉表皮的保衛(wèi)細胞有較強的表達,在其它組織幾乎不表達。另外,保衛(wèi)細胞中CuAO5的表達受ABA、ACC、SA和暗等處理的誘導。6.在12天齡幼苗中,CuAO6在根、下胚軸、葉中均有表達,但下胚軸和葉中的表達高于根,且在根、下胚軸和葉中維管組織部位的表達都高于其它部位。在花器官中,CuAO6僅在柱頭及萼片維管組織中有微弱表達。三周齡和五周齡時,CuAO6在根中不再表達;三周齡時,CuAO6在葉中的表達顯著降低,僅在葉緣的排水器中表達,但到五周齡時CuAO6在葉片的葉肉組織和維管組織中均又表達,且維管組織中的表達高于葉肉組織。在成熟的三周齡葉片中,CuAO6在排水器中表達,在保衛(wèi)細胞中不表達。ABA、ACC、SA和暗處理均不能誘導保衛(wèi)細胞中CuAO6的表達。7.在12天齡、三周齡和五周齡的不同發(fā)育階段,在各個器官或組織中均未檢測到CuAO7的表達。ABA、ACC、SA和暗處理亦不能誘導保衛(wèi)細胞CuAO7的表達。8.在12天齡幼苗中,CuAO8在根、下胚軸、葉中均有表達,但下胚軸和葉中的表達高于根,且在根、下胚軸、葉中維管組織的表達都高于其它組織。在花器官中,CuAO8在花的萼片、花絲、柱頭、花瓣維管組織中均有明顯表達。12天齡、三周齡和五周齡三個發(fā)育階段相比,CuAO8在根中的表達量隨發(fā)育階段的延長逐漸上升;在葉中的表達量先下降再上升。另外,在成熟的三周齡葉片中,CuAO8也在排水器及保衛(wèi)細胞中表達,且暗處理能顯著誘導該基因在保衛(wèi)細胞中的表達。9.在12天齡幼苗中,CuAO9在根、下胚軸、葉中均不表達;在花器官中,CuAO9僅在花的柱頭及萼片維管組織有微量表達。隨著植物的發(fā)育,CuAO9在根中仍不表達;但到三周齡和五周齡時,CuAO9在葉中有表達,且在葉片維管組織中的表達高于周圍其它組織。在成熟的三周齡葉片中,CuAO9在排水器中有表達,在保衛(wèi)細胞中不表達。ABA、ACC、SA和暗處理均不能誘導保衛(wèi)細胞CuAO9的表達。10.在12天齡幼苗中,ATAO1在根、下胚軸、葉中均有表達,下胚軸中的表達高于根和葉,且各器官中維管組織的表達皆高于周圍組織。在五周齡的生殖階段,ATAO1在花器官的萼片、花瓣、花絲和柱頭中均有表達。隨著擬南芥的發(fā)育,ATAO1在根和葉中的表達均呈上升趨勢,且維管組織中的表達量始終高于周圍組織。另外,在成熟的三周齡葉片中,ATAO1在排水器及保衛(wèi)細胞中均表達。SA處理能抑制保衛(wèi)細胞中ATAO1的表達。
【學位單位】：陜西師范大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：Q943.2
【部分圖文】：

３．３擬南芥銅胺氧化酶家族基因的表達分析??３．３．１?０＾０／的表達分析??如圖１６所示，我們首先對１２天齡的幼苗進行了?ＧＵＳ染色，發(fā)現(xiàn)ＣｄＯｉ在根、??下胚軸、葉中均有表達，而且下胚軸和葉柄中的表達要高于根和葉。在根中，維??管組織中的表達較高，表皮和皮層中的表達較低；在下胚軸中，維管組織中的表??達也要高于周圍組織；在葉中，葉維管組織中的表達亦高于周圍的組織。接下來，??我們對１２天齡的幼苗進行了?ＧＦＰ熒光觀察，如圖１７所示，我們同樣發(fā)現(xiàn)，０＾０７??在根尖不表達，在主根、下胚軸中，維管組織中的表達明顯高于周圍組織，而且??ＧＦＰ熒光分析進一步顯示，在葉肉細胞、葉表皮細胞、葉保衛(wèi)細胞中都有??表達。綜合以上結(jié)果說明，在１２天齡的幼苗中，０＾０７在根、下胚軸、葉中均有??表達

噸械謀澩鋝鉅�。壤_跡保端?荊?冢保蔡熗涓?校?崳?ＣＷＩＯ／主要在維管組織中表達，根維管組織周圍的皮層和表皮組織表達很低，根??尖部位也不表達（圖１７）；隨著植物發(fā)育階段的延長，在三周齡時，０＾０７在根??中表達量升高，此時根尖部位也有明顯的表達；五周齡時，表達量進一步上升。??但是，在各個發(fā)育階段中，維管組織中的表達量始終高于表皮和皮層。與根中的??表達趨勢類似，在１２天齡葉中，ＣｄＯ／在葉維管組織中的表達高于周圍其他組織，??隨著植物的發(fā)育，在三周齡時，０＾０／在葉中表達量升高，五周齡時，表達量進??一步上升。但是，在葉的各個發(fā)育階段，維管組織中的表達量始終高于周圍其他??組織。同時，在三周齡成熟葉片中，ＣＵ４０／不僅在葉的維管組織、葉肉組織有表??達，在葉表皮細胞、保衛(wèi)細胞以及葉緣的排水器的位置也有表達。到了五周齡的??ｍｍｍ??■圍＿??１?????１?Ｉ?＿?ｍｍｍｍｒｎｍｍｍｍ??圖１７．／？Ｑ＾Ｏ／的轉(zhuǎn)基因植物（１２天幼苗）的ＧＦＰ熒光觀察。??Ｆｉｇｕｒｅ?１７．?ＧＦＰ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐＣｕＡＯＪ?ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ?ｐｌａｎｔｓ?（１２?ｄａｙ－ｏｌｄ?ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ）．??（Ａ）子葉表皮細胞及氣孔

陜西師范大學碩士學位論文??如圖１８所示，我們首先對１２天齡的幼苗進行了?ＧＵＳ染色，發(fā)現(xiàn)在根、??下胚軸、葉中均有較高表達。但總體看來，下胚軸和葉柄中的表達仍要高于根和??幼苗／報?根?軸／根尖／花?葉??＇？?７?ｊｍＦ?．?ｊｍＦ??Ｊｒ?Ｊｒ??１?ｃｍ?１０ｐｍ?１０?ｐｍ?１０?ｐｍ??夢‘?一?ＨＨＢＢ?ｍｍ?畫??１０ｍｍ＼??Ｉ、０?（％??１０?ｐｍ?１０?ｐｍ?ｊｊｊ?１０ｍｍ??ｍｍｍ?ｍｍ?＊?■■■??：參—、??圖１８．／７Ｇｄ（９２的轉(zhuǎn)基因植物的ＧＵＳ染色分析??Ｆｉｇｕｒｅ?１８．?ＧＵＳ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｐＣｕＡ０２?ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ?ｐｌａｎｔｓ．??Ａ?—ｉｒｆ＾ｉ??屆＿??■?＿＿??Ｉｉ＇－＃ｉ??ｍｍｍ??【）＊??Ｅｍ？—＿＾??Ｆ?ＨＨ?，：ｉ??圖１９．／７〇＾０２的轉(zhuǎn)基因植物（１２天幼苗）的ＧＦＰ熒光觀察。??Ｆｉｇｕｒｅ?１９?ＧＦＰ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐＣｕＡ０２?ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ?ｐｌａｎｔｓ?（１２?ｄａｙ－ｏｌｄ?ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ）．??（Ａ）子葉表皮細胞及氣孔，ｂａｒ＝２０ｐｍ；?（Ｂ）子葉氣孔，ｂａｒ＝５［ｉｍ；?（Ｃ）子葉葉肉細胞，ｂａｒ＝４０ｐｍ；?（Ｄ）??下胚軸，ｂａｒ＝１００ｊｉｍ；?（Ｅ）主根，ｂａｒ＝１００｜ｉｍ；?（Ｆ）根尖，ｂａｒ＝１００＾ｘｍ。??４０??
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本文編號：2885817