發(fā)布時(shí)間：2020-11-01 21:31

　　 白血病以其居高不下的發(fā)病率和死亡率廣受關(guān)注。血液惡性腫瘤比實(shí)體瘤更易發(fā)生染色體變異,而染色體易位和缺失會(huì)導(dǎo)致融合基因的產(chǎn)生。融合基因類型與白血病的發(fā)生、治療及預(yù)后息息相關(guān)。在臨床上對(duì)白血病初診患者進(jìn)行融合基因篩查,對(duì)患者的診斷分型、治療方案和預(yù)后方案的選擇至關(guān)重要。本論文首次將多色媒介探針熔解曲線分析技術(shù)應(yīng)用于白血病融合基因檢測(cè)當(dāng)中,發(fā)展了一種適合臨床檢測(cè)的高效簡(jiǎn)便、快速準(zhǔn)確、高通量低成本的融合基因篩查體系。第一章,首先對(duì)白血病及其發(fā)病機(jī)制,融合基因的產(chǎn)生進(jìn)行了簡(jiǎn)要的介紹,并闡述了融合基因?qū)Π籽〉闹虏�、治療與預(yù)后造成影響的分子生物學(xué)機(jī)制,分類別介紹了融合基因的臨床檢測(cè)意義。同時(shí)比較了目前常見的幾種融合基因檢測(cè)方法,羅列出其優(yōu)點(diǎn)和不足之處。對(duì)本文所使用的多色媒介探針熔解曲線分析技術(shù)進(jìn)行原理介紹,最后提出本文的研究目的,內(nèi)容與意義。在第二章的材料與方法中,我們首先描述了體系的檢測(cè)對(duì)象選取原則,實(shí)驗(yàn)體系的設(shè)計(jì)策略。隨后根據(jù)融合基因的斷裂位點(diǎn),針對(duì)每種融合基因制定引物和媒介探針設(shè)計(jì)方案。結(jié)合媒介探針的設(shè)計(jì)原則,在保證特異性的前提下設(shè)計(jì)并篩選引物與媒介探針。在完成46個(gè)檢測(cè)對(duì)象的單重體系建立的基礎(chǔ)上,我們建立了兩管五色檢測(cè)白血病46種融合基因的檢測(cè)體系。并對(duì)體系加以優(yōu)化,考察體系的性能,最后使用臨床標(biāo)本對(duì)體系進(jìn)行考察。第三章為結(jié)果與分析。檢測(cè)體系的A反應(yīng)管為32重PCR體系,共檢測(cè)24個(gè)融合基因。B反應(yīng)管為24重PCR體系,共檢測(cè)22個(gè)融合基因。在體系的特異性考察中,兩個(gè)反應(yīng)管各熔解峰區(qū)分良好,陽(yáng)性標(biāo)本之間不產(chǎn)生交叉信號(hào),陰性標(biāo)本不產(chǎn)生非特異信號(hào),說(shuō)明該體系特異性良好;在重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中,體系兩個(gè)反應(yīng)管的各熔解峰Tm值穩(wěn)定(CV1%);使用梯度稀釋的質(zhì)粒作為模板進(jìn)行靈敏度分析考察,A反應(yīng)管與B反應(yīng)管的檢測(cè)靈敏度均可達(dá)1000拷貝/反應(yīng);對(duì)340份臨床標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),共檢出90份陽(yáng)性標(biāo)本,檢測(cè)結(jié)果經(jīng)過(guò)單基因?qū)崟r(shí)PCR和測(cè)序驗(yàn)證,結(jié)果均一致,表明該檢測(cè)體系檢測(cè)結(jié)果可靠準(zhǔn)確。本文建立的白血病融合基因多色熔解曲線分析體系,可實(shí)現(xiàn)常見46種融合基因的同時(shí)檢測(cè),具有特異性高、方便快捷、檢測(cè)覆蓋面廣、檢測(cè)通量高等諸多優(yōu)點(diǎn),具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。在臨床上可與染色體核型分析相結(jié)合用于白血病初診患者的融合基因篩查。
【學(xué)位單位】：廈門大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R733.7
【部分圖文】：

圖１－１：正常造血細(xì)胞分化過(guò)程??Ｆｉｇ．?１－１：?Ｎｏｒｍａｌ?ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ．?Ｄｅｒｉｖｅｄ?ｆｒｏｍ?Ｐａｓｓｅｇｕｅ?ｅ／??白血病涉及的發(fā)病細(xì)胞及其來(lái)源，發(fā)病進(jìn)程較多且繁雜，按照其發(fā)病進(jìn)程??及發(fā)病細(xì)胞分化程度，可以分為急性白血病（ＡＬ，ａｃｕｔｅ?ｌｅｕｋｅｍｉａ）及慢性白血??病（ＣＬ，ｃｈｒｏｎｉｃ?ｌｅｕｋｅｍｉａ）；而根據(jù)惡性細(xì)胞的源系，可分為髓系細(xì)胞白血病??（ｍｙｅｌｏｂｌａｓｔ）和淋巴系細(xì)胞白血病（ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔ）?［４］。具體的分類方式，又有??不同的診斷標(biāo)準(zhǔn)。最早提出的分類標(biāo)準(zhǔn)是１９７８年制定的ＦＡＢ分型法［５］，按照細(xì)??胞形態(tài)學(xué)方法將急性白血病分為了急性淋巴系細(xì)胞白血�。ǎ粒蹋蹋�?ａｃｕｔｅ??ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ?ｌｅｕｋｅｍｉａ），急性髓系細(xì)胞白血病（ＡＭＬ，ａｃｕｔｅ?ｍｙｅｌｏｉｄ?ｌｅｕｋｅｍｉａ）??和骨髓異常增生癥（ＭＤＳ，ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ?ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ），后經(jīng)過(guò)多次修訂，將??ＡＭＬ具體分為８?jìng)�(gè)亞型，將ＡＬＬ分為３個(gè)亞型［６］。ＦＡＢ分型法雖判定方式較為??片面單一，但目前仍為廣大醫(yī)院診斷白血病所采用。在ＦＡＢ分型法提出之后，??

圖３－１：融合基?

?１?－??ｆｉｃＦＲＡ?ＭＬＦ，?ＭＬＬ．ＥＵ?ＭＬＬ－ＡＨ７?ＨＯＸ”Ｌ２?ＡＭＬＵＥＴＯ?麵?ＤＥＫ－ＣＡＮ?瞧?ＴＬＳ－ＥＲＧ?ＡＭＵ－＾ＡＰ?ＭＴＧ１６??圖３－１：融合基因檢測(cè)體系Ａ檢測(cè)管結(jié)果示意圖??Ｆｉｇ．?３－１：?Ｔｈｅ?ｄｉａｇｒａｍ?ｆｏｒ?ｔｈｅ?Ｔｕｂｅ?Ａ?ｏｆ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｌｅｕｋｅｍｉａ?ｆｕｓｉｏｎ?ｇｅｎｅｓ??４４??
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 肖恒;李守霞;;白血病融合基因及檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2015年22期

2 黃慧;楊文萍;徐紅艷;;FISH技術(shù)在骨髓/血液標(biāo)本中的應(yīng)用體會(huì)[J];臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;2013年01期

本文編號(hào)：2866128