ELAV1基因對前列腺癌PC-3細胞的作用及機制研究
發(fā)布時間：2020-10-31 21:16
目的:觀察ELAV1基因對去勢抵抗性前列腺癌PC-3細胞的作用及相關機制研究。方法:應用qRT-PCR、Western blot、免疫組化、免疫熒光等方法檢測去勢抵抗性前列腺癌PC-3細胞、正常前列腺上皮RWPE-1細胞中ELAV1基因和蛋白表達水平,同時收集12例去勢抵抗性前列腺癌和癌旁標本采用免疫組化法檢測ELAV1蛋白在細胞核和細胞質中的表達情況。將Ad5.-ELAV1 shRNA-GFP轉染前列腺癌PC-3細胞來對細胞中的ELAV1進行沉默,通過CCK-8檢測PC-3細胞增殖能力的變化、流式細胞儀檢測細胞周期的變化和Western blot檢測細胞中COX-2、Cyclin D1、PI3K、Akt、pAkt的蛋白表達變化。建立前列腺癌PC-3細胞皮下移植瘤模型27只,采用隨機數(shù)字表法將其分為3組,每組9只,分別給予瘤內(nèi)注射Ad5.-ELAV1 shRNA-GFP、Ad5.-GFP、生理鹽水,每3天測量1次移植瘤體積觀察移植瘤生長情況,并于2周后收取移植瘤進行稱重并進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。結果:qRT-PCR、Western blot結果顯示PC-3細胞中ELAV1基因和蛋白表達水平均高于RWPE-1細胞,免疫熒光、細胞免疫組化顯示PC-3細胞中的ELAV1蛋白主要集中表達于細胞質,而在RWPE-1細胞中則主要表達于細胞核。12例前列腺癌和癌旁組織標本免疫組化結果也同樣顯示ELAV1蛋白在前列腺癌中主要表達細胞質,在癌旁組織中主要表達于細胞核。CCK-8、細胞周期等實驗結果顯示PC-3細胞中ELAV1基因被沉默后其增殖能力下降、細胞周期被阻滯在G1期。Western-blot實驗證實與腫瘤細胞生長有關的COX-2、與腫瘤細胞周期阻滯有關的Cyclin D1表達明顯降低;此外,腫瘤信號通路相關分子PI3K、Akt及磷酸化Akt的表達均下降。裸鼠移植瘤收取后顯示Ad5.-ELAV1 shRNA-GFP移植瘤的體積和重量與對照病毒Ad5.-GFP組相比明顯減小(P0.05)。結論:ELAV1蛋白在前列腺癌中高表達且主要表達于細胞質;ELAV1蛋白通過PI3K/Akt經(jīng)典腫瘤信號通路對前列腺癌細胞的生長起著促進作用。
【學位單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R737.25
【部分圖文】：
蘭州大學碩士研究生學位論文 ELAV1 基因對前列腺癌 PC-3 細胞的作用及機制研究2.3.2 ELAV1 蛋白在前列腺癌中的表達定位（1） 細胞免疫組化結果顯示 ELAV1 蛋白在 RWPE-1 中細胞核中深染，細胞質中染色較淺并且無 ELAV1 蛋白染色顆粒，提示該分子主要集中表達于細胞核中；而在 PC-3 細胞中，細胞核中該蛋白分子表達較淺，細胞質中出現(xiàn)明顯的蛋白顆粒提示該蛋白主要在細胞質中表達（詳見圖 2.3.3）。12 例前列腺癌組織免疫組化結果顯示前列腺癌中的 ELAV1 蛋白表達于細胞核和細胞質，但主要集中表達于細胞質（詳見 2.3.4 C 圖黑色箭頭），而癌旁組織中的 ELAV1 蛋白集中表達于細胞核（詳見 2.3.4 D 圖黑色箭頭）。綜上，ELAV1 蛋白在前列腺細胞的細胞核和細胞質中均有表達，但是在正常前列腺上皮細胞中集中表達于細胞核中，而在前列腺癌細胞中集中表達于細胞質中。
蘭州大學碩士研究生學位論文 ELAV1 基因對前列腺癌 PC-3 細胞的作用及機制研究2.3.2 ELAV1 蛋白在前列腺癌中的表達定位（1） 細胞免疫組化結果顯示 ELAV1 蛋白在 RWPE-1 中細胞核中深染，細胞質中染色較淺并且無 ELAV1 蛋白染色顆粒，提示該分子主要集中表達于細胞核中；而在 PC-3 細胞中，細胞核中該蛋白分子表達較淺，細胞質中出現(xiàn)明顯的蛋白顆粒提示該蛋白主要在細胞質中表達（詳見圖 2.3.3）。12 例前列腺癌組織免疫組化結果顯示前列腺癌中的 ELAV1 蛋白表達于細胞核和細胞質，但主要集中表達于細胞質（詳見 2.3.4 C 圖黑色箭頭），而癌旁組織中的 ELAV1 蛋白集中表達于細胞核（詳見 2.3.4 D 圖黑色箭頭）。綜上，ELAV1 蛋白在前列腺細胞的細胞核和細胞質中均有表達，但是在正常前列腺上皮細胞中集中表達于細胞核中，而在前列腺癌細胞中集中表達于細胞質中。
組化結果顯示前列腺癌中的 ELAV1 蛋白表達于細胞核和細胞質，但主要集中表達于細胞質（詳見 2.3.4 C 圖黑色箭頭），而癌旁組織中的 ELAV1 蛋白集中表達于細胞核（詳見 2.3.4 D 圖黑色箭頭）。綜上，ELAV1 蛋白在前列腺細胞的細胞核和細胞質中均有表達，但是在正常前列腺上皮細胞中集中表達于細胞核中，而在前列腺癌細胞中集中表達于細胞質中。圖2.3.1 ELAV1mRNA在不同細胞中的表達水平 圖2.3.2 ELAV1蛋白在不同細胞中的表達情況
【相似文獻】
本文編號：2864520
【學位單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R737.25
【部分圖文】：
蘭州大學碩士研究生學位論文 ELAV1 基因對前列腺癌 PC-3 細胞的作用及機制研究2.3.2 ELAV1 蛋白在前列腺癌中的表達定位（1） 細胞免疫組化結果顯示 ELAV1 蛋白在 RWPE-1 中細胞核中深染，細胞質中染色較淺并且無 ELAV1 蛋白染色顆粒，提示該分子主要集中表達于細胞核中；而在 PC-3 細胞中，細胞核中該蛋白分子表達較淺，細胞質中出現(xiàn)明顯的蛋白顆粒提示該蛋白主要在細胞質中表達（詳見圖 2.3.3）。12 例前列腺癌組織免疫組化結果顯示前列腺癌中的 ELAV1 蛋白表達于細胞核和細胞質，但主要集中表達于細胞質（詳見 2.3.4 C 圖黑色箭頭），而癌旁組織中的 ELAV1 蛋白集中表達于細胞核（詳見 2.3.4 D 圖黑色箭頭）。綜上，ELAV1 蛋白在前列腺細胞的細胞核和細胞質中均有表達，但是在正常前列腺上皮細胞中集中表達于細胞核中，而在前列腺癌細胞中集中表達于細胞質中。
蘭州大學碩士研究生學位論文 ELAV1 基因對前列腺癌 PC-3 細胞的作用及機制研究2.3.2 ELAV1 蛋白在前列腺癌中的表達定位（1） 細胞免疫組化結果顯示 ELAV1 蛋白在 RWPE-1 中細胞核中深染，細胞質中染色較淺并且無 ELAV1 蛋白染色顆粒，提示該分子主要集中表達于細胞核中；而在 PC-3 細胞中，細胞核中該蛋白分子表達較淺，細胞質中出現(xiàn)明顯的蛋白顆粒提示該蛋白主要在細胞質中表達（詳見圖 2.3.3）。12 例前列腺癌組織免疫組化結果顯示前列腺癌中的 ELAV1 蛋白表達于細胞核和細胞質，但主要集中表達于細胞質（詳見 2.3.4 C 圖黑色箭頭），而癌旁組織中的 ELAV1 蛋白集中表達于細胞核（詳見 2.3.4 D 圖黑色箭頭）。綜上，ELAV1 蛋白在前列腺細胞的細胞核和細胞質中均有表達，但是在正常前列腺上皮細胞中集中表達于細胞核中，而在前列腺癌細胞中集中表達于細胞質中。
組化結果顯示前列腺癌中的 ELAV1 蛋白表達于細胞核和細胞質，但主要集中表達于細胞質（詳見 2.3.4 C 圖黑色箭頭），而癌旁組織中的 ELAV1 蛋白集中表達于細胞核（詳見 2.3.4 D 圖黑色箭頭）。綜上，ELAV1 蛋白在前列腺細胞的細胞核和細胞質中均有表達，但是在正常前列腺上皮細胞中集中表達于細胞核中，而在前列腺癌細胞中集中表達于細胞質中。圖2.3.1 ELAV1mRNA在不同細胞中的表達水平 圖2.3.2 ELAV1蛋白在不同細胞中的表達情況
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1 蔡忠林;ELAV1基因對前列腺癌PC-3細胞的作用及機制研究[D];蘭州大學;2018年
本文編號：2864520
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