目的:觀察ELAV1基因?qū)θ莸挚剐郧傲邢侔㏄C-3細(xì)胞的作用及相關(guān)機(jī)制研究。方法:應(yīng)用qRT-PCR、Western blot、免疫組化、免疫熒光等方法檢測去勢抵抗性前列腺癌PC-3細(xì)胞、正常前列腺上皮RWPE-1細(xì)胞中ELAV1基因和蛋白表達(dá)水平,同時收集12例去勢抵抗性前列腺癌和癌旁標(biāo)本采用免疫組化法檢測ELAV1蛋白在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中的表達(dá)情況。將Ad5.-ELAV1 shRNA-GFP轉(zhuǎn)染前列腺癌PC-3細(xì)胞來對細(xì)胞中的ELAV1進(jìn)行沉默,通過CCK-8檢測PC-3細(xì)胞增殖能力的變化、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期的變化和Western blot檢測細(xì)胞中COX-2、Cyclin D1、PI3K、Akt、pAkt的蛋白表達(dá)變化。建立前列腺癌PC-3細(xì)胞皮下移植瘤模型27只,采用隨機(jī)數(shù)字表法將其分為3組,每組9只,分別給予瘤內(nèi)注射Ad5.-ELAV1 shRNA-GFP、Ad5.-GFP、生理鹽水,每3天測量1次移植瘤體積觀察移植瘤生長情況,并于2周后收取移植瘤進(jìn)行稱重并進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。結(jié)果:qRT-PCR、Western blot結(jié)果顯示PC-3細(xì)胞中ELAV1基因和蛋白表達(dá)水平均高于RWPE-1細(xì)胞,免疫熒光、細(xì)胞免疫組化顯示PC-3細(xì)胞中的ELAV1蛋白主要集中表達(dá)于細(xì)胞質(zhì),而在RWPE-1細(xì)胞中則主要表達(dá)于細(xì)胞核。12例前列腺癌和癌旁組織標(biāo)本免疫組化結(jié)果也同樣顯示ELAV1蛋白在前列腺癌中主要表達(dá)細(xì)胞質(zhì),在癌旁組織中主要表達(dá)于細(xì)胞核。CCK-8、細(xì)胞周期等實驗結(jié)果顯示PC-3細(xì)胞中ELAV1基因被沉默后其增殖能力下降、細(xì)胞周期被阻滯在G1期。Western-blot實驗證實與腫瘤細(xì)胞生長有關(guān)的COX-2、與腫瘤細(xì)胞周期阻滯有關(guān)的Cyclin D1表達(dá)明顯降低;此外,腫瘤信號通路相關(guān)分子PI3K、Akt及磷酸化Akt的表達(dá)均下降。裸鼠移植瘤收取后顯示Ad5.-ELAV1 shRNA-GFP移植瘤的體積和重量與對照病毒Ad5.-GFP組相比明顯減小(P0.05)。結(jié)論:ELAV1蛋白在前列腺癌中高表達(dá)且主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì);ELAV1蛋白通過PI3K/Akt經(jīng)典腫瘤信號通路對前列腺癌細(xì)胞的生長起著促進(jìn)作用。
【學(xué)位單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R737.25
【部分圖文】：

蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 ELAV1 基因?qū)η傲邢侔?PC-3 細(xì)胞的作用及機(jī)制研究2.3.2 ELAV1 蛋白在前列腺癌中的表達(dá)定位（1） 細(xì)胞免疫組化結(jié)果顯示 ELAV1 蛋白在 RWPE-1 中細(xì)胞核中深染，細(xì)胞質(zhì)中染色較淺并且無 ELAV1 蛋白染色顆粒，提示該分子主要集中表達(dá)于細(xì)胞核中；而在 PC-3 細(xì)胞中，細(xì)胞核中該蛋白分子表達(dá)較淺，細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)明顯的蛋白顆粒提示該蛋白主要在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)（詳見圖 2.3.3）。12 例前列腺癌組織免疫組化結(jié)果顯示前列腺癌中的 ELAV1 蛋白表達(dá)于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)，但主要集中表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)（詳見 2.3.4 C 圖黑色箭頭），而癌旁組織中的 ELAV1 蛋白集中表達(dá)于細(xì)胞核（詳見 2.3.4 D 圖黑色箭頭）。綜上，ELAV1 蛋白在前列腺細(xì)胞的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均有表達(dá)，但是在正常前列腺上皮細(xì)胞中集中表達(dá)于細(xì)胞核中，而在前列腺癌細(xì)胞中集中表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中。

蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 ELAV1 基因?qū)η傲邢侔?PC-3 細(xì)胞的作用及機(jī)制研究2.3.2 ELAV1 蛋白在前列腺癌中的表達(dá)定位（1） 細(xì)胞免疫組化結(jié)果顯示 ELAV1 蛋白在 RWPE-1 中細(xì)胞核中深染，細(xì)胞質(zhì)中染色較淺并且無 ELAV1 蛋白染色顆粒，提示該分子主要集中表達(dá)于細(xì)胞核中；而在 PC-3 細(xì)胞中，細(xì)胞核中該蛋白分子表達(dá)較淺，細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)明顯的蛋白顆粒提示該蛋白主要在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)（詳見圖 2.3.3）。12 例前列腺癌組織免疫組化結(jié)果顯示前列腺癌中的 ELAV1 蛋白表達(dá)于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)，但主要集中表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)（詳見 2.3.4 C 圖黑色箭頭），而癌旁組織中的 ELAV1 蛋白集中表達(dá)于細(xì)胞核（詳見 2.3.4 D 圖黑色箭頭）。綜上，ELAV1 蛋白在前列腺細(xì)胞的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均有表達(dá)，但是在正常前列腺上皮細(xì)胞中集中表達(dá)于細(xì)胞核中，而在前列腺癌細(xì)胞中集中表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中。

組化結(jié)果顯示前列腺癌中的 ELAV1 蛋白表達(dá)于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)，但主要集中表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)（詳見 2.3.4 C 圖黑色箭頭），而癌旁組織中的 ELAV1 蛋白集中表達(dá)于細(xì)胞核（詳見 2.3.4 D 圖黑色箭頭）。綜上，ELAV1 蛋白在前列腺細(xì)胞的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均有表達(dá)，但是在正常前列腺上皮細(xì)胞中集中表達(dá)于細(xì)胞核中，而在前列腺癌細(xì)胞中集中表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中。圖2.3.1 ELAV1mRNA在不同細(xì)胞中的表達(dá)水平 圖2.3.2 ELAV1蛋白在不同細(xì)胞中的表達(dá)情況
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1 蔡忠林;ELAV1基因?qū)η傲邢侔㏄C-3細(xì)胞的作用及機(jī)制研究[D];蘭州大學(xué);2018年

本文編號：2864520