發(fā)布時間：2020-10-27 13:55

　　 第一部分:結石基因多態(tài)性的相關性研究目的:研究含鈣結石患者與正常健康者各臨床數據間的關系,并對結石相關基因多態(tài)性位點進行研究,尋找出尿石癥的易感基因和決定疾病易感性的單核昔酸多態(tài)性位點,進一步研究尿石癥的分子發(fā)病機制。方法:釆用病例對照研究的方法,在住院病人中收集502例結石患者,體檢中心篩選同結石患者匹配的健康正常受試者500例為對照組,記錄各組病人一般情況及臨床化驗指標。選取全基因組關聯研究(GWAS)與腎結石的形成相關的導致尿鈣增高的4個基因:TRPV5、CLDN14、KLOTHO及DGKH,通過Hapmap數據庫及haploview4.2軟件篩選出4個基因的標簽SNP的12位點,采用Illumina高通量二代測序方法進行基因分型技術檢測尿石癥組及對照組的相關基因和其12個位點,通過Hardy-Weinberg(HWE)遺傳平衡定律分析各基因型的代表性;分析各基因多態(tài)性位點及其與尿路結石發(fā)病的風險關聯。結果:1.結石組和對照組一般情況比較:在體重指數和血糖兩組有明顯差異,結石組明顯高于對照組(P0.05),且結石組患者體重為超重(體重指數24),血糖水平高于正常(6.726.72±1.765.9),而對照組體重指數及血糖水平在正常范圍.2.TRPV5、CLDN14、KLOTHO及DGKH基因型頻率在對照組均符合Hardy-Weinberg(HWE)平衡定律(P0.05)。(1)對TRPV5基因三個多態(tài)性位點的基因型進行分析比較時,我們發(fā)現僅rs 4252418多態(tài)性位點與尿路結石的發(fā)病風險顯著相關。與AA純合子基因型攜帶者相比,AG雜合子基因型攜帶者發(fā)生尿路結石的OR值為0.010(95%CI=0.007~0.015,P=0.000)。(2)KLOTHO基因三個多態(tài)性位點中rs397703多態(tài)性位點與尿路結石的發(fā)病風險顯著相關,與CC純合子基因型攜帶者相比,TT純合子基因型及CT雜合子基因型攜帶者發(fā)生尿路結石的OR值為0.387(95%CI=0.013~0.036,P=0.000)。(3).CLDN14基因型三個多態(tài)性位點的基因型進行分析比較時,我們發(fā)現rs 219780多態(tài)性位點與尿路結石的發(fā)病風險顯著相關,與GG純合子基因型攜帶者相比,AG雜合子基因型攜帶者發(fā)生尿路結石的OR值為0.438(95%CI=0.316,1.832,P=0.045)與尿路結石的發(fā)病風險顯著相關的多態(tài)性位點。(4).DGKH基因型頻率三個多態(tài)性位點的基因型進行分析比較時,我們未發(fā)現與尿路結石的發(fā)病風險顯著相關的多態(tài)性位點。結論:1.臨床指標比較,結石組體重指數和血糖明顯高于健康對照組;2.TRPV5基因rs4252418多態(tài)性位點可能與尿路結石的發(fā)病風險顯著相關。AA純合子基因型攜帶者更易發(fā)生尿路結石;3.KLOTHO基因rs397703多態(tài)性位點與尿路結石的發(fā)病風險顯著相關,CC純合子基因型攜帶者有較高的發(fā)生尿路結石的風險;4.CLDN14基因型rs 219780多態(tài)性位點與尿路結石的發(fā)病風險顯著相關,GG純合子基因型攜帶者有較高的尿路結石發(fā)生的風險;5.DGKH基因型三個多態(tài)性位點未發(fā)現與尿路結石發(fā)生的相關風險。第二部分:結石相關的基因-基因、基因-環(huán)境交互作用研究目的:對影響尿石癥的較為重要的社會(環(huán)境)因素及基因—基因之間關系進行探討,分析基因—基因、基因—環(huán)境的交互作用,探討基因和環(huán)境因素在尿石癥發(fā)病中的相互作用。以期發(fā)現能夠顯著增加疾病的發(fā)病風險的基因、環(huán)境因素的組合形式。方法:通過對以往文獻檢索找出影響尿石癥發(fā)生的社會(環(huán)境)影響因素,對病例和對照進行問卷調查收集數據,采用叉生分析分析基因—基因、基因—環(huán)境的交互作用,分析探討基因與基因和基因與環(huán)境因素在尿石癥發(fā)病中的相互作用。結果:1.TRPV5-Rs4252418和CLDN14-Rs219780的交互作用具有統(tǒng)計學意義(P0.05):(1)TRPV5-Rs4252418和CLDN14-Rs219780的交互作用S=1.19,說明兩者有正交互作用,即TRPV5和CLDN14在尿路結石發(fā)生上有相互增加的風險。AP=0.23,表明兩基因等位基因均突變時相對于尿路結石的發(fā)生有23%的風險是兩基因交互作用。RERI=0.20表明由于兩基因的交互作用發(fā)生尿路結石風險是未知原因(OR=1)的0.20倍(P0.05)。(2).TRPV5-Rs4252418和KLOTHO-Rs397703的交互作用S=1.56,說明兩者有正交互作用,即TRPV5和KLOTHO在尿路結石發(fā)生上有相互增加的風險。AP=0.03,表明兩基因等位基因均突變時相對于尿路結石的發(fā)生有3%的風險是兩基因交互作用。RERI=0.12表明由于兩基因的交互作用發(fā)生尿路結石風險是未知原因(OR=1)的0.12倍(P0.05)。2.TRPV5、CLDN14和KLOTHO與環(huán)境因素飲水量通過叉生分析進行模型統(tǒng)計檢驗后,基于相加模型的交互作用未發(fā)現有統(tǒng)計學意義,但基于相乘模型的交互作用有一個統(tǒng)計學意義(ORint=0.65,P’=0.002);TRPV5-Rs4252418和飲水量交互作用時OR1,說明兩者有正交互作用,表明兩者均突變時可增加尿路結石發(fā)生的風險。結論:1.TRPV5-Rs4252418和CLDN14-Rs219780尿路結石發(fā)生上兩者有正交互作用;2.TRPV5-Rs4252418和KLOTHO-Rs397703相互作用有增加尿路結石發(fā)生的風險;3.TRPV5-Rs4252418和飲水量交互作用時有正交互作用,兩者均突變時可增加尿路結石發(fā)生的風險。第三部分:TRPV5在含鈣結石腎臟及正常腎臟中的表達目的:比較細胞膜鈣離子通道TRPV5在含鈣腎結石患者和正常無結石者腎臟中表達的差異,探討TRPV5在含鈣腎結石形成中的作用機制,方法:選取我院2017年前手術患者中含鈣結石組及正常對照組各5例,結石組病例均經24H尿液分析結果尿鈣水平高于正常(男性300mg/24h、女性250 mg/24h)的因結石導致手術切除的腎臟或經PCNL術畢退鞘時取少量腎皮質組織,且術后常規(guī)結石成分分析證實為含鈣結石的患者5例,其中男性3例,女性2例,平均年齡55.6±16.21歲,腎鑄型結石1例,多發(fā)性結石4例。正常對照組5例為尿鈣均正常的腎癌患者,男性2例,女性3例,平均年齡53.2±14.37歲,取組織結構正常的腎臟皮質,5例患者術前均經B超和CT等影像檢查均無結石,術中術后也未發(fā)現結石,無腎臟萎縮等其他因素影響。通過免疫組化及Western-blot比較TRPV5在含鈣腎結石患者和正常無結石者腎臟中表達的差異。結果:分別對兩組腎組織進行免疫組化及Western-blot檢查,采用Image-pro plus 6.0及ImageJ圖像分析軟件對圖片進行分析,t檢驗結果顯示含鈣結石組腎組織的TRPV5蛋白表達水平在免疫組化及Western-blot檢查中均明顯低于其在正常組腎組織中的表達水平,免疫組化(平均光密度:t=4.198,p=0.001,P0.01;平均累計光密度:t=2.963,p=0.013);Western-blot(灰度值:t=4.951,p=0.008,P0.01)。結論:在含鈣腎結石組患者腎組織的TRPV5蛋白表達水平明顯低于其在正常組腎組織中的表達水平。
【學位單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R691.4
【部分圖文】：

12 個位點 PCR 條帶瓊脂糖凝膠電泳圖泳 道 對應位點編號 目的條帶大�。╞p）1 rs4236480 4062 rs4252418 4113 rs6947073 2194 rs1207568 4645 rs3752472 3196 rs397703 2107 rs219765 2318 rs219780 3199 rs4378885 23710 rs2324850 39211 rs4142110 45412 rs9566910 475
【參考文獻】

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1 李瑞莉;呂敏;肖峰;王利紅;崔明明;政曉果;楊慧敏;陳博文;;中國5城市社區(qū)老年人代謝綜合征患病率調查[J];現代預防醫(yī)學;2013年03期

2 何靜兵;謝輝;孫文斌;李舟躍;劉玉海;王國榮;張世宏;唐安;;舟山海島地區(qū)腎結石發(fā)病情況及影響因素分析[J];中國初級衛(wèi)生保健;2008年09期

3 李偉;張旭;王少剛;施宗偉;居正華;趙聲龍;陳曉竹;;Tamm-Horsfall蛋白對草酸鈣結晶成核和聚集的影響[J];中華實驗外科雜志;2007年04期

4 張澤,陳文忠,李遜,歐莉莉,潘瀅,吳開俊;大體積復雜性含鈣腎結石晶體成分特點[J];廣東醫(yī)學;2004年03期

5 許四虎,程錦泉,周華,張福林;深圳市腎結石的流行病學調查報告[J];中華泌尿外科雜志;1999年11期

6 徐辰;宋日進;王曉嵐;張煒;張煒;;維生素D受體、Klotho基因多態(tài)性與尿路含鈣結石的相關性研究[J];中華實驗外科雜志;2013年12期

本文編號：2858609