目的:探究成纖維細(xì)胞生長因子受體3(Fibroblast Growth Factor Receptor-3,FGFR3)基因的沉默對高骨轉(zhuǎn)移性人肺腺癌SPC-A-1BM細(xì)胞的影響及其對裸鼠骨轉(zhuǎn)移的影響。方法:本實驗共分為3個組:其中1組設(shè)置為實驗組(FGFR3特異性siRNA干擾組),2組設(shè)置為陰性對照組(FGFR3非特異性陰性對照siRNA干擾組),3組設(shè)置為空白對照組(無siRNA干擾組)。通過核酸轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)體Lipofectamine~(TM)2000(Lipo2000)介導(dǎo)siRNA轉(zhuǎn)染高骨轉(zhuǎn)移性人肺腺癌細(xì)胞株(SPC-A-1BM細(xì)胞株);實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time PCR)用于檢測轉(zhuǎn)染后FGFR3基因的m RNA表達(dá)水平;蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western-Blot)用于檢測轉(zhuǎn)染前后FGFR3基因的蛋白表達(dá)水平;通過裸鼠尾靜脈注射法進(jìn)行建模,對各組裸鼠分別注射轉(zhuǎn)染后的肺癌SPC-A-1BM細(xì)胞;蘇木精-伊紅染色法(hematoxylin-eosin staining,HE染色法)用于制作裸鼠部分組織病理切片染色,明確各組裸鼠的肺癌SPC-A-1BM細(xì)胞骨轉(zhuǎn)移的病理診斷,并進(jìn)行區(qū)分對比各組骨轉(zhuǎn)移的情況。結(jié)果:利用Lipo2000作為載體進(jìn)行轉(zhuǎn)染的各組siRNA對肺腺癌SPC-A-1BM細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率可達(dá)約70%以上;Real-time PCR實驗顯示,實驗組1組的FGFR3基因的表達(dá)被明顯抑制,抑制率約為71%,和陰性對照組2組與空白對照組3組的FGFR3基因的表達(dá)量相對比,可見到明顯的下調(diào),利用單因素方差分析,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);Western-Blot實驗顯示,對于FGFR3蛋白,實驗組1組相對比陰性對照組2組和空白對照組3組的蛋白表達(dá)量明顯減少,各組條帶灰度值之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);各組裸鼠通過尾靜脈注射法建模后,通過陰性對照組2組和空白對照組3組可以看出,約有50%-60%的裸鼠可見到不同程度的骨轉(zhuǎn)移;經(jīng)組織解剖取病理、制作蠟塊、切片并進(jìn)行HE染色實驗顯示,實驗組1組相比較陰性對照組2組與空白對照組3組的裸鼠,發(fā)生肺癌骨轉(zhuǎn)移的裸鼠數(shù)量及裸鼠骨轉(zhuǎn)移的部位均明顯減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論:利用Lipo2000作為載體介導(dǎo)的siRNA技術(shù)轉(zhuǎn)染SPC-A-1BM細(xì)胞沉默F(xiàn)GFR3基因可明顯抑制肺癌細(xì)胞的侵襲能力,并能減少骨轉(zhuǎn)移的發(fā)生及發(fā)展;本實驗為針對FGFR3基因沉默的骨轉(zhuǎn)移瘤治療方法提供了理論依據(jù),為肺癌骨轉(zhuǎn)移的治療提供了新的治療靶點(diǎn)。
【學(xué)位單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R734.2
【部分圖文】：

條帶顏色越深，亮度越高，說明含有的目的蛋白量越多。相反條帶越淺，則含有的目的蛋白越少。如圖所示，圖1中從左至右依次為1、2、3組，Anti-FGFR3條帶中1組的條帶亮度較2、3組條帶亮度低，2組陰性對照組與3組空白對照組的條帶亮度相近，用Image J軟件進(jìn)行灰度分析，結(jié)果顯示，1組的條帶灰度值與2組、3組相對比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.01；2組、3組條帶灰度值之間無統(tǒng)計學(xué)差異，P＞0.05。由圖2柱狀圖中各組灰度值的比較能更清晰地對比出實驗組

較2、3組條帶亮度低，2組陰性對照組與3組空白對照組的條帶亮度相近，用Image J軟件進(jìn)行灰度分析，結(jié)果顯示，1組的條帶灰度值與2組、3組相對比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.01；2組、3組條帶灰度值之間無統(tǒng)計學(xué)差異，P＞0.05。由圖2柱狀圖中各組灰度值的比較能更清晰地對比出實驗組與對照組之間具有明顯差異。

SPF環(huán)境下飼養(yǎng)的裸鼠
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2856857