目的:通過對(duì)人HepG2細(xì)胞轉(zhuǎn)染載有NFAT-Sh RNA的慢病毒,觀察其對(duì)HepG2細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。方法:設(shè)計(jì)3種針對(duì)NFAT基因的ShRNA的干擾序列及陰性對(duì)照序列,采用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的方式構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系,挑選出干擾效率最高的ShRNA組用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),采用qRT-PCR法檢測(cè)慢病毒轉(zhuǎn)染后NFAT mRNA及VEGFA mRNA表達(dá)情況,Western Blot法檢測(cè)NFAT蛋白及VEGFA蛋白表達(dá)量,CCK-8法檢測(cè)HepG2細(xì)胞增殖情況,Transwell法檢測(cè)細(xì)胞遷徙及侵襲能力。結(jié)果:3種干擾慢病毒中以ShRNA103干擾效果最好。3種NFAT-ShRNA干擾作用后,NFAT、VEGFA mRNA及蛋白水平相對(duì)于對(duì)照組降低(P0.05),陰性對(duì)照組未見明顯變化。CCK-8結(jié)果顯示干擾組細(xì)胞增殖能力較對(duì)照組受到抑制。Transwell結(jié)果顯示干擾組細(xì)胞遷徙及侵襲能力較對(duì)照組均有所下降。結(jié)論:通過RNA干擾技術(shù)沉默NFAT基因后,其細(xì)胞增殖能力及遷徙侵襲能力均下降,其作用可能與調(diào)節(jié)VEGFA有關(guān),為靶向NFAT基因治療原發(fā)性肝癌提供相關(guān)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【學(xué)位單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R735.7
【部分圖文】：

圖 1 熒光顯微鏡觀察各組 HepG2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染效1.2.2 qRT-PCR 檢測(cè)穩(wěn)定細(xì)胞株中 NFAT mRN圖 2 結(jié)果顯示，陰性對(duì)照組與對(duì)照組之NFAT-ShRNA101、NFAT-ShRNA102、NFAT-表達(dá)較對(duì)照組及陰性對(duì)照組降低，差異有統(tǒng)計(jì)表達(dá)載體的慢病毒后能有效沉默人肝癌 HeShRNA103 干擾效果最明顯，干擾效率最高。VEGFA mRNA 表達(dá)較對(duì)照組及陰性對(duì)照組

D圖 1 熒光顯微鏡觀察各組 HepG2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染1.2.2 qRT-PCR 檢測(cè)穩(wěn)定細(xì)胞株中 NFAT mR圖 2 結(jié)果顯示，陰性對(duì)照組與對(duì)照組之NFAT-ShRNA101、NFAT-ShRNA102、NFAT表達(dá)較對(duì)照組及陰性對(duì)照組降低，差異有統(tǒng)表達(dá)載體的慢病毒后能有效沉默人肝癌 HShRNA103 干擾效果最明顯，干擾效率最高VEGFA mRNA 表達(dá)較對(duì)照組及陰性對(duì)照組

圖 3 HepG2 各組細(xì)胞轉(zhuǎn)染后 VEGFAmRNA1.2.3 Western Bolt 檢測(cè)各組穩(wěn)定細(xì)胞株中 NF圖 4 結(jié)果顯示，陰性對(duì)照組與對(duì)照組蛋NFAT-ShRNA101、NFAT-ShRNA102、NFAT-ShRN達(dá)水平較對(duì)照組及陰性對(duì)照組降低，其中 ShRNA其干擾效果最明顯，干擾效率最高。圖 5 結(jié)果顯示白水平表達(dá)較對(duì)照組及陰性對(duì)照組降低。A B C D
【參考文獻(xiàn)】

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1 王建;沈中陽;鄭衛(wèi)萍;劉濤;宋紅麗;;他克莫司在體外對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2和HepG2.2.15增殖的影響[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合外科雜志;2014年03期

本文編號(hào)：2855889