目的:通過對人HepG2細胞轉(zhuǎn)染載有NFAT-Sh RNA的慢病毒,觀察其對HepG2細胞生物學行為的影響。方法:設計3種針對NFAT基因的ShRNA的干擾序列及陰性對照序列,采用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的方式構建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞系,挑選出干擾效率最高的ShRNA組用于后續(xù)實驗,采用qRT-PCR法檢測慢病毒轉(zhuǎn)染后NFAT mRNA及VEGFA mRNA表達情況,Western Blot法檢測NFAT蛋白及VEGFA蛋白表達量,CCK-8法檢測HepG2細胞增殖情況,Transwell法檢測細胞遷徙及侵襲能力。結果:3種干擾慢病毒中以ShRNA103干擾效果最好。3種NFAT-ShRNA干擾作用后,NFAT、VEGFA mRNA及蛋白水平相對于對照組降低(P0.05),陰性對照組未見明顯變化。CCK-8結果顯示干擾組細胞增殖能力較對照組受到抑制。Transwell結果顯示干擾組細胞遷徙及侵襲能力較對照組均有所下降。結論:通過RNA干擾技術沉默NFAT基因后,其細胞增殖能力及遷徙侵襲能力均下降,其作用可能與調(diào)節(jié)VEGFA有關,為靶向NFAT基因治療原發(fā)性肝癌提供相關實驗依據(jù)。
【學位單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R735.7
【部分圖文】：

圖 1 熒光顯微鏡觀察各組 HepG2 細胞轉(zhuǎn)染效1.2.2 qRT-PCR 檢測穩(wěn)定細胞株中 NFAT mRN圖 2 結果顯示，陰性對照組與對照組之NFAT-ShRNA101、NFAT-ShRNA102、NFAT-表達較對照組及陰性對照組降低，差異有統(tǒng)計表達載體的慢病毒后能有效沉默人肝癌 HeShRNA103 干擾效果最明顯，干擾效率最高。VEGFA mRNA 表達較對照組及陰性對照組

D圖 1 熒光顯微鏡觀察各組 HepG2 細胞轉(zhuǎn)染1.2.2 qRT-PCR 檢測穩(wěn)定細胞株中 NFAT mR圖 2 結果顯示，陰性對照組與對照組之NFAT-ShRNA101、NFAT-ShRNA102、NFAT表達較對照組及陰性對照組降低，差異有統(tǒng)表達載體的慢病毒后能有效沉默人肝癌 HShRNA103 干擾效果最明顯，干擾效率最高VEGFA mRNA 表達較對照組及陰性對照組

圖 3 HepG2 各組細胞轉(zhuǎn)染后 VEGFAmRNA1.2.3 Western Bolt 檢測各組穩(wěn)定細胞株中 NF圖 4 結果顯示，陰性對照組與對照組蛋NFAT-ShRNA101、NFAT-ShRNA102、NFAT-ShRN達水平較對照組及陰性對照組降低，其中 ShRNA其干擾效果最明顯，干擾效率最高。圖 5 結果顯示白水平表達較對照組及陰性對照組降低。A B C D
【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 王建;沈中陽;鄭衛(wèi)萍;劉濤;宋紅麗;;他克莫司在體外對肝癌細胞HepG2和HepG2.2.15增殖的影響[J];中國中西醫(yī)結合外科雜志;2014年03期

本文編號：2855889